2X 探针法qPCR Mix

2X 探针法qPCR Mix

产品及特点本产品是基于荧光探针检测的即用型 PCR 试剂盒，可以对靶片段进行实时定量 PCR 分（quantitative PCR、qPCR）。产品含有经过优化的缓冲液组分、热启动 Taq DNA 聚合酶、Taq DNA 稳定剂、dNTPs、MgCl2和稳定剂等所有实时定量 PCR 所需要的成分，用户只需加入基因组 DNA 或 cDNA 模板、引物和探针即可进行探针法实时定量 PCR 反应，具有广泛的用途。本产品具有下列特点：

1. 以 2×Mix 提供，用户只需准备模板、引物、探针和 ROX 染料（取决于 qPCR 仪器）即可以进行探针法实时定量 PCR 实验，非常方便快捷，降低了操作误差。

2. 各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。灵敏度高时可以达到 50 拷贝/反应（跟模板质量，引物设计等相关）。

3. 既可用于 TaqMan 探针 qPCR，也可以是分子信标（molecular beacon）探针 qPCR。

4. 灵敏度和专一性比染料法荧光定量 PCR 更高。

5. 可用于基因表达分析、SNP 分析、拷贝数分析等实验。也可以用于定性检测。

6. 本产品只能用于科研，1mL 足够 100 次 20uL 体系的探针法 qPCR 反应。500、7500 Fast、MJ Opticon、MJ Chromo4、Corbett RotorGene 3000。

2. 放入荧光 PCR 仪中进行扩增, 下表的扩增参数仅供参考，一定需要根据靶分子长度，引物和探针的 Tm 值、标记染料的种类等进行调节。一般选择三步法 PCR：

规格及成分 成 份 编 号 塑料袋包装 十孔盒包装
2×探针法 qPCR Mix 190303 1 mL（棕色盖） 1 mL（棕色盖）×10
使用手册 190303sc 1 份 1 份

步骤 反应参数 备注

预变性 94℃ 2 分钟

PCR（35-45 次循环）

94℃ 15 秒

靶分子 长 度 最 好 在

80-200bp

55-65℃ 15-30 秒

在此步采集荧光信号，通

道根据标记染料决定

72℃ 30 秒

如果引物 Tm 值接近 60℃，也可以选择两步法 PCR：

步骤 反应参数 备注

预变性 94℃ 2 分钟

PCR（35-45 次循环）

94℃ 15 秒

靶分子 长 度 最 好 在

80-200bp

60℃ 60 秒

在此步采集荧光信号，通

道根据标记染料决定

3. 数据处理

如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性。一般情况下，阴性对照 Ct 大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则为阴性，如果小于 40，则为阳性