柱式真菌DNAout2.0

柱式真菌DNAout2.0

产品及特点 

真菌 DNA 提取是一个难题，一是因为真菌有菌丝体、孢子等多种完全不同的结构形态，二是因为其细胞壁一般都很厚，比较难以破碎。本产品专门用于从真菌孢子和液体培养的真菌细胞中提取 DNA。它具有下列特点：

1. 即开即用，提供包括玻璃珠、离心吸附柱在内的所有试剂和耗材。

2. 既可以采取液氮研磨法破裂真菌，也可用玻璃珠法破碎真菌，两种方法均属于物理方法，远比基于蜗牛酶或破壁酶的温和化学破壁法重复性好，也不容易带入外源真菌 DNA（注：文献报道蜗牛酶或破壁酶中常常有外源真菌 DNA 污染，用于提取真菌 DNA 往往会造成污染）。

3. 本方法提取一个样品只需要 20 余分钟，方便、快速和高效。

4. 一次可以处理 5 mL 的过夜真菌培养物，所得的基因组 DNA OD260/OD280 一般都在 1.8 左右，长度一般在 20 kb 左右，每 mL 菌液的 DNA 产率一般在 1-3ug。可以直接用于 PCR 和酶切等后续试验。运输及保存 常温运输及保存，保存期为一年。 自备试剂 无菌水。 使用方法 1. 收集菌体或孢子:

1.1、 对菌液：取 3-5 mL 过夜培养的真菌菌液 (OD600一般在 1 以上)到干净的塑料离心管中，12000 rpm 离心 2 分钟弃上清留菌体沉淀。

1.2、 对菌落：用接种针在在培养基上刮取尽可能多的真菌菌落（约 50mg），转移到装有 1mL 自备无菌水的干净的塑料离心管中，洗涤下接种环上的菌体。12000 rpm 离心 2 分钟弃上清留菌体沉淀。

1.3、 对孢子材料，一般取 0.1g 左右，直接加入到塑料离心管中，然后进入下一步操作。

2. 在上述真菌材料中加入自备的无菌水 1mL，振荡半分钟后 12000 rpm 离心 2 分钟弃上清留菌体沉淀。此步用于洗涤菌体。

3. 裂解真菌：

3.1、 液氮研磨：在研钵中液氮研磨上述真菌材料成粉，然后转移到干净的离心管中，在离心管中加入 500 uL 溶液 A，常温涡旋震荡 3 分钟。

3.2、 玻璃珠破碎法：在没有液氮的条件下，采用此法。在菌体沉淀中加入 500uL 溶液 A 和 0.5 克的玻璃珠，常温涡旋震荡 10 分钟。

4. 在离心管中加入 500 uL 溶液 B，涡旋震荡 3 分钟，12000 rpm 离心 2 分钟，将上清液全部转移到一个 5mL 的干净的塑料离心管中。

5. 在上清中加入 3 倍体积的溶液 C，颠倒数次混匀后，分三次上离心吸附柱，每次上柱后均先室温放置 2 分钟，然后 12000 rpm 离心 1 分钟，倒掉穿透液，再第二次上柱，重复上面的操作，直到挂柱步骤完成。

6. 在离心吸附柱中加入 500 uL 通用洗柱液，12000 rpm 离心 1 分钟，倒掉穿透液。此步可以洗涤掉杂质。

7. 重复上步操作一次。

8. 12000 rpm 空柱离心 1 分钟。

9. 加入 50-100 uL DNA 洗脱液 2.0，室温放置 1 分钟以上，12000 rpm 离心 1分钟，穿透液即为真菌 DNA 样品。

10.为了得到更多的 DNA 样品，可以重复上步操作 1-2 次。

11.所得 DNA 即可立即使用或放冰箱长期保存。