mRNA 纯化试剂盒

mRNA 纯化试剂盒

产品及特点

构建 cDNA 文库、、蛋白质体外翻译和 RT-PCR 检测稀有的 mRNA 等研究常 常需要从总 RNA 中分离 mRNA。 mRNA 只占总 RNA 的 1%左右，但由于带 poly（A）尾巴，所以可以通过与 Oligo（dT）纤维素的亲和结合而与其他 RNA（如 rRNA、tRNA 等）分离开。本产品就是基于此原理开发的、专门用于从总 RNA 中 提取 mRNA 的试剂盒。它具有下列特点：

1. 一站式，，即开即用，非常方便。

2. 一次可以处理约 10-15 ug 总 RNA，从中可得 0.1-0.5 ug 左右的 mRNA。

3. Oligo（dT）纤维素吸附能力强，每克可以吸附 50-80 OD 的 mRNA，相当 于 2000-3000 ug mRNA。

4. 离心法、只需要离心就可以完成，免去了常规的灌柱、洗柱等繁琐操作。

5. 得到的 mRNA 可以直接用于构建 cDNA 文库、蛋白质的体外翻译和 RT-PCR。

6. 本试剂盒足够 25 次微量 mRNA 提取实验。 
规格及成分 成分 编号 小扁盒包装 
结合液 LM80817a 100 mL Oligo(dT)纤维素 LM80817b 25 mg RNase-free 水 80403 10 mL 微量核酸沉淀剂 50903 10 mL 使用手册 80817sc 1 份 运输及保存
常温运输，收到货后 Oligo(dT)纤维素最好放-20℃长期保存，有效期一年。
自备试剂 75%乙醇

使用方法 本产品提供 25 mg Oligo(dT)纤维素，每克 Oligo(dT)纤维素能够结合 50-80 OD 的 mRNA。

1. 将 250uL 结合液加入到装有 25 mg Oligo(dT)纤维素的离心管中。

2. 洗涤纤维素：取 10 uL（相当于 1mg Oligo (dT)纤维素）与 0.5 mL 结合液 混匀，室温放置 5 分钟。10 uL 相当于 1mg Oligo (dT)纤维素。剩余部分放 -80℃保存。1000g 离心 30 秒，小心吸弃结合液后留 Oligo (dT)纤维素沉 淀待用。

3. 将自备的总 RNA 100uL（如果体积不足 100 uL，用 RNase-free 水补足）， 65℃加热 5 分钟。

4. 加入等体积（100uL）的结合液，混匀后冷却到室温。 5. 全部转移到装有 Oligo(dT)纤维素的离心管中，混匀后室温放置 5 分钟，期 间颠倒混匀数次。

6. 4℃ 1000 g 离心 5 分钟，小心将上清转移到一个离心管中。此上清液是去 除了 mRNA 的总 RNA。可以-80℃保存作为阴性对照。如果 mRNA 回收失 败也可以再次用于纯化。

7. 洗涤一次：加入 0.5 mL 结合液，混匀后 4℃ 1000g 离心 5 分钟，小心弃上 清。

8. 重复上步的洗涤步骤 2-4 次。

9. 在加入 50 uL RNase-free 水，混匀后 4℃ 1000 g 离心 5 分钟，小心收集 上清（mRNA）。

10. 重复上步 1 次。

11. 将各次收集的 mRNA 混合，即为 mRNA 溶液。

12. 按微量核酸沉淀剂的方法沉淀 mRNA，具体操作如下：

13. 按 2:1 的比例将微量核酸沉淀剂与 mRNA 溶液混合。注意：微量核酸沉 淀剂取用前需要摇匀。

14. 室温 15000g 离心 10 分钟。

15. 弃上清后加自备的 75%乙醇 1 mL，振荡混匀。

16. 15000g 离心 5 分钟，弃上清。

17. 再短暂离心后小心吸弃上清，沉淀即为回收的 mRNA 沉淀，可溶于 RNase-free 水中直接使用或放-80℃保存。