ProteinaseK 蛋白酶K 100mg
产品介绍:
Proteinase K(蛋白酶K)是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,用于生物样品中蛋白质的一般降解。从林伯氏白色念球菌 (tritirachium album limber) 中纯化得到,是以丝氨酸为活性中心的蛋白分解酶,分解蛋白质的活性较强。具有广泛的底物特异性,特别优先分解与疏水氨基酸,含硫氨基酸,芳香族氨基酸的C末端邻接的酯键和肽键。本品在Ca2+盐的溶液中活性稳定,并且在SDS或尿素等蛋白质变性剂存在下活性升高。并在较广的PH范围内(PH4-12.5)均有活性。在组织或细胞核酸分离时,使核酸酶(RNA和DNA)以及反应中其他酶失活。该酶有两个ca2+结合位点,它们离酶的活性中心有一定距离,与催化机理并无直接关系。然而,如果从该酶中除去ca2+,由于出现远程的结构变化,催化活性将丧失80%左右,但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以,蛋白酶k消化过程中通常加入edta(以抑制依赖于mg2+的核酸酶的作用)。但是,如果要消化对蛋白酶k具有较强耐性的蛋白,如角蛋白一类,则可能需要使用含有1mmol/l ca2+而不含edta的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGTA(ph8.0)至终浓度为2mmol/l,以鳌合ca2+。
活力:40mAnsom u/mg
工作浓度:50—100μg/ml。
性状:粉末
用途:生化研究。广谱蛋白酶,95C加热10分钟,则完全失活。可替代DEPC处理RNA抽提用的离心管和枪头,实现灭活RNase A的目的,也用于处理RNase-Free的水。充分降解组织或细胞中蛋白质分子特别是核酸,以达到释放和萃取高质量核酸的辅助试剂。用于质粒或基因组DNA、RNA的分离以及蛋白多肽印迹实验推荐反应缓冲液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2 。
蛋白酶K配制标准:20mg/ml蛋白酶K配制标准(proteinase K):将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
注意事项:蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,以增加探针与靶核酸结合的机会,提高杂交信号.但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时,都会对细胞的结构有一定的破坏,导致组织切片的脱落,细胞核的消失,从而影响杂交结果.EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用,解决上述出现的问题,并能达到理想的染色效果.
孵育温度为55至65℃,理想孵育温度为58℃,孵育时间为15分钟至48小时;理想孵育时间为2小时。
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