花生源性成分核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

 花生源性成分核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

花生源性成分核酸检测试剂盒（一管式 PCR-荧光探针法）

◆ 产品说明

物种鉴定系列中的过敏原鉴定试剂，可针对食品中过敏原成分的特异核酸片段进行扩增，通过实时扩

增曲线判定结果。本产品用于糕点、糖果、冰淇淋等食品中过敏原花生成分的检测，检出限为 0.01%。

◆ 产品组成（96 测试

试剂 含量

A-花生源-P 20μL × 8 管× 12 排

NG-P 100μL × 3 支

PG-花生源-P 100μL × 2 支

◆ 适用仪器

ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600 等实时荧光 PCR 仪。

◆ 自备耗材和仪器

①冰盒；②移液器（0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套灭菌吸头；③离心机；④涡旋混匀器；⑤金属浴。

◆ 注意事项

1．本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。

1）一区：样本制备区。

2）第二区：模板添加区。

3）第三区：扩增及产物分析区。

★ 分区之间好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。

2．实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。

3．严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。

4．反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心 30

秒，并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。

5．反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。

6．不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。

◆样品处理

参照《SN/T 1961.2-2007 食品中过敏原成分检测方法 第 2 部分：实时荧光 PCR 方法检测花生成分》或其他标

准处理样品，制备的样本保存待用。

称取约 200g 样品，用洁净研钵或合适的粉碎装置将样品粉碎至粉末状。称取 300mg 粉状样品提取 DNA。

样品的采集和制备是过敏原成分鉴别的重要步骤，为防止交叉污染，应使用一次性消耗品，研钵应经 160℃干

烤 2 h，其他不宜干烤或高压处理的器皿应使用 1%次**钠溶液浸泡。

详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。

◆ 实验操作

1.模板制备（样本制备区）

建议使用配套动物基因组 DNA 提取试剂盒，具体过程详见产品说明书。

2.添加模板（模板添加区，放置于冰盒上进行）

请于-20℃条件下保存，有效期 12 个月

SM-022022LⅡ-A02

2

剪下所需测试数的已含有反应液的 PCR 管，放置在室温待解冻后，离心 30 秒后揭开封口膜，向每管反应液

中分别加入 5μL 模板，顺序为 NG、待测样品模板、PG-花生源-P。盖好配套的 PCR 管盖后，涡旋混匀 30s，离心

1min，立即进行 PCR 扩增反应。

3.扩增反应（扩增及产物分析区）

使用荧光定量 PCR 仪，荧光基团选择 FAM，淬灭基团选择 TAMRA。

按下列条件设置扩增反应：

PCR 循环 荧光收集位点

95℃ 10 分钟 1 个循环 —

95℃ 15 秒

45 个循环

—

60℃ 1 分钟 ※

4.基线和阈值设定

基线范围选择一般在 6-15 个循环，如果有强阳性样本，应根据实际情况调整基线范围。阈值线应超过阴性对

照扩增曲线的高点，且 Ct 值不出现任何数值。

◆ 结果判定

检测样品无荧光增幅现象，并且阳性对照、阴性对照、提取对照结果正常者，可判定该样品中未检出过敏原花

生成分。

检测样品 Ct 值≤40，曲线有明显的荧光增幅现象，并且阳性对照、阴性对照、提取对照结果正常者，可判定

该样品中检出过敏原花生成分。

检测样品 Ct 值在 40-45 之间，应重做实时荧光 PCR 反应。再次扩增后的结果 Ct 值仍在 40~45 之间，并且阳性

对照、阴性对照、提取对照结果正常者，可判定该样品中检出过敏原花生成分，否则判定该样品中未检出过敏原花

生成分。

两个平行样中只要有一个样品检测为阳性，即可判定该样品中检出过敏原花生成分。

★ NG 反应为平滑直线，PG 反应为“S”型扩增曲线，此次检测结果有效，否则无效。如重复检测结果仍为无效，请与技术支持

人员联系。