INVSc1感受态细胞

INVSc1感受态细胞

INVSc1 Chemically Competent Cell 产品说明书

产品规格 （CAT#: LM1050）

INVSc1 Competent Cell:                                      100μl/支              保存： -80℃（3个月）

pYES2 (control vector, 10 ng/μl)                              10μl               保存：-80℃（12个月）

Carrier DNA (10 μg/μl)                                             100μl              保存：-20℃（12个月）

PEG/LiAC:                                                                    5ml              保存：    4℃（12个月）

INVSc1感受态细胞基因型

MATa his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52/MATα his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52 

INVSc1感受态细胞产品说明

INVSc1菌株是专门用来做重组蛋白表达的宿主酵母，pYES2质粒与INVSc1酵母配套使用，激活pYES2质粒的GAL1启动子的转录进而启动下游重组蛋白的表达。INVSc1为合子型，可直接通过PEG/LiAc将pYES2质粒转化进入INVSc1细胞内。质粒pYES2的筛选标志为URA，可用SD-URA板进行筛选。INVSc1感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pYES2质粒检测转化效率>10⁴ cfu/μg DNA。

INVSc1感受态细胞操作方法

1. 取100 μl冰上融化的INVSc1感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 μg，Carrier DNA (95-100℃，5 min，快速冰浴，重复一次) 10 μl，PEG/LiAc 500 μl并吸打几次混匀，30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。

2. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。

3. 5000 rpm离心 40 s弃上清，ddH₂O 400 μl 重悬，离心 30s弃上清。

4. ddH2O 50 μl重悬，涂质粒筛选用：SD-U medium板，29℃培养48-96 h。

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. INVSc1酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。

同一批感受态细胞，用含目的片段的T载体质粒转化（阳性对照）能长出密密麻麻的菌落，而用另一种载体和目的片段的连接产物转化，却一个菌都没长出来，重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关，还是连接出了问题？哪个可能性大些？

答：应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照，确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。

感受态细胞放到-80冰箱了有半年了，还能用来转化质粒吗？

答：如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况，是可以用来转化的，但是由于冻存时间过长，转化效率会有所下降，如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的，如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。