XL1-Blue MRF` Kan感受态细胞

XL1-Blue MRF` Kan感受态细胞

XL1-Blue MRF` Kan Chemically Competent Cell 产品说明书 

产品规格 （CAT#: LM1031）

XL1-Blue MRF` Kan:                                      100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                       10μl

保存条件（保质期）：                           -80℃（6个月）

XL1-Blue MRF` Kan感受态细胞基因型

?(mcrA)183 ?(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac [F′proAB lacIqZ?M15 Tn5 (Kan^R)]

XL1-Blue MRF` Kan感受态细胞产品说明

XL1-Blue MRF’Kan菌株来源于XL1-Blue株系，是限制酶系统缺失型[?(mcrA)183, ?(mcrCB-hsdSMR -mrr)173],，且具有卡那霉素抗性 (Kan^R)，可转化具有氯霉素或四环素抗性的质粒。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。hsdR17突变导致EcoK核酸内切酶系统缺失，增强了外源DNA的稳定性和提取质量。 lacI^qZΔM15 的存在使XL1-Blue MRF’Kan菌株可用于蓝、白斑筛选。XL1-Blue MRF’Kan感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>10⁸cfu/μg DNA。

XL1-Blue MRF` Kan感受态细胞操作方法

1. XL1-Blue MRF’Kan感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA并用手拨打EP管底充分混匀，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或

LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. XL1-Blue MRF’Kan感受态细胞具有卡那霉素抗性，不可转化具有卡那霉素抗性的质粒。

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

同一批感受态细胞，用含目的片段的T载体质粒转化（阳性对照）能长出密密麻麻的菌落，而用另一种载体和目的片段的连接产物转化，却一个菌都没长出来，重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关，还是连接出了问题？哪个可能性大些？

答：应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照，确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。

感受态细胞放到-80冰箱了有半年了，还能用来转化质粒吗？

答：如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况，是可以用来转化的，但是由于冻存时间过长，转化效率会有所下降，如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的，如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。