JM330感受态细胞
JM330 Chemically Competent Cell 产品说明书
产品规格(CAT#: LM2020)
JM330: 100μl/支
pUC19 (control vector,10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期): -80℃(6个月)
JM330感受态细胞基因型
F- φ80 lacZ?M15 ?(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rk-, mk+) phoA supE44 λ-thi-1 gyrA96 relA1 tonA
产品说明
JM330菌株(即DH5α T1 Phage Resistant),来源于DH5α菌株。在DH5α大肠杆菌基因组中引入tonA,赋予其抗噬菌体T1,T5的能力,即为JM330。JM330菌株最大的特点是其可以在体内特异性降解甲基化质粒模板,广泛应用于各种DNA定点突变试验中。JM330菌株缺失核酸内切酶 (endA1)和重组酶(recA1),提高了质粒DNA的产量和质量; lacZΔM15的存在使JM330可用于蓝、白斑筛选。唯地生物开发的JM330感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>1×109 cfu/μg DNA。
JM330感受态细胞操作方法
1. JM330感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(例如:Dpn I消化产物等)并用手拨打EP管底混匀,冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB),混匀后37℃,200 rpm复苏70分钟。
4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体,留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱至少15小时。
JM330感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2. JM330可以对未被Dpn I降 解掉的质粒模板进行进一步的降解,因此可以保证定点突变具有更高的阳性率。
3. 转化高浓度的质粒或Dpn I消化产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
![QQ图片20181128145241.png QQ图片20181128145241.png](https://img1.17img.cn/17img/images/201811/uepic/79713afa-fd28-4b72-bcba-ac7e8d5df20d.jpg)
同一批感受态细胞,用含目的片段的T载体质粒转化(阳性对照)能长出密密麻麻的菌落,而用另一种载体和目的片段的连接产物转化,却一个菌都没长出来,重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关,还是连接出了问题?哪个可能性大些?
答:应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照,确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。
感受态细胞放到-80冰箱了有半年了,还能用来转化质粒吗?
答:如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况,是可以用来转化的,但是由于冻存时间过长,转化效率会有所下降,如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的,如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。