JM108感受态细胞

JM108感受态细胞

JM108 Chemically Competent Cell 产品说明书 

产品规格（CAT#: LM1022）

JM108：                                                     100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存条件(保质期)：                            -80℃（6个月） 

JM108感受态细胞基因型

F- endA1 recA1 gyrA96 thi-1 relA1 glnV44 Δ(lac-proAB) hsdR17 (rK- mK+) 

JM108感受态细胞产品说明

JM108来源于JM106菌株，最初是作为黏粒文库的宿主被改造而成。 JM108菌株缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型 (recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA 的稳定性。JM108菌株最大的特点是扩繁质粒产量大，纯度高，且质量稳定，特别是超螺旋质粒比例较高，超螺旋质粒所占比例一般>90%(gyrA96突变型说明JM108菌株的DNA-gyrase 基因被突变，导致拓扑异构酶Ⅱ的功能受影响，增加了超螺旋质粒的比例)，非常适合后续的动物细胞转染实验（超螺旋质粒可提高细胞转染的效率）。此外该菌株具有萘啶酸抗性。唯地生物开发的JM108感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>0.5×10⁹ cfu/μg DNA。

JM108感受态细胞操作方法

1. JM108感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏70分钟。

4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱至少13小时。

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

同一批感受态细胞，用含目的片段的T载体质粒转化（阳性对照）能长出密密麻麻的菌落，而用另一种载体和目的片段的连接产物转化，却一个菌都没长出来，重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关，还是连接出了问题？哪个可能性大些？

答：应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照，确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。

感受态细胞放到-80冰箱了有半年了，还能用来转化质粒吗？

答：如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况，是可以用来转化的，但是由于冻存时间过长，转化效率会有所下降，如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的，如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。