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GT115感受态细胞

供货周期: 现货
品牌: LMAI Bio
规格: 100μl
货号: CAT#: LM1090
CAS号:
报价: 面议
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产品介绍

GT115感受态细胞

GT115 Chemically Competent Cell 产品说明书 




产品规格(CAT#: LM1090)


GT115:                                                      100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存条件(保质期):                            -80℃(6个月) 



GT115感受态细胞基因型

FmcrA?(mrr-hsdRMS-mcrBC) f80lacZDM15?lacX74 recA1 rpsL (StrR) endA1 ?dcm uidA(DMluI)::pir-116?sbcC-sbcD


GT115感受态细胞产品说明

GT115菌株,是专门用来克隆含有发夹结构(Hairpin)或重复序列等DNA二级结构的基因序列的大肠杆菌菌株。大肠杆菌中存在一种SbcCD蛋白复合体,可以识别DNA发夹结构,并将其切除;将sbcCsbcD两个基因突变,增强了发夹结构DNA的稳定性。同时在大肠杆菌基因组中引入uidA(DMluI)::pir-116,使GT115可以表达 兀 蛋白,含有R6Kg ori复制子的质粒( pCpG-mcs、pCpG-LacZ、pCpG-siRNA …)可以正常复制。该菌株还含有具有核酸酶 (endA)突变、重组酶 (recA)突变,增强了外源DNA的稳定性。GT115感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19检测转化效率>2×10cfu/μg DNA。



GT115感受态细胞操作方法



1. GT115感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富,可提高转化效率)。

4. 37℃,225 rpm复苏60分钟。

5. 5000 rpm离心1分钟收菌,留取100 μl左右上清吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。

6. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。



 

注意事项


1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。混入目的DNA时应轻柔操作。转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

2. 此菌株具有链霉素抗性,拥有这种抗性的质粒无法使用

QQ图片20181128145241.png

同一批感受态细胞,用含目的片段的T载体质粒转化(阳性对照)能长出密密麻麻的菌落,而用另一种载体和目的片段的连接产物转化,却一个菌都没长出来,重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关,还是连接出了问题?哪个可能性大些?

答:应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照,确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。



感受态细胞放到-80冰箱了有半年了,还能用来转化质粒吗?

答:如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况,是可以用来转化的,但是由于冻存时间过长,转化效率会有所下降,如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的,如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。



GT115感受态细胞信息由上海联迈生物工程有限公司为您提供,如您想了解更多关于GT115感受态细胞报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。除供应GT115感受态细胞外,上海联迈生物工程有限公司还可为您提供VCaP;人前列腺癌细胞【已通过STR鉴定】、U-937;人组织细胞淋巴瘤细胞【已通过STR鉴定】、WPMY-1;人正常前列腺基质永生化细胞【已通过STR鉴定】等产品,公司有专业的客户服务团队,是您值得信赖的合作伙伴。
工商信息

企业名称

上海联迈生物工程有限公司

企业信息已认证

企业类型

信用代码

310117003747946

成立日期

2017-09-26

注册资本

100

经营范围

从事生物科技、医疗科技领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让,仪器仪表、机电设备、机械设备、玻璃制品、电子产品、一类医疗器械、化工产品及原料(除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、民用爆炸物品、易制毒化学品)的销售。【依法须经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动】

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