一、 HMG1试剂盒;人高迁移率族蛋白1(HMG1)ELISA试剂盒说明
本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗HMG1单抗包被于酶标板上,标准品与样品中的HMG1与单抗结合,加入生物素化的抗HMG1抗体,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加入酶底物TMB,出现蓝色,加终止液硫酸,颜色变黄,在450nm处测OD值,HMG1浓度与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中HMG1浓度。
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二、HMG1试剂盒;人高迁移率族蛋白1(HMG1)ELISA试剂盒组份
组份 | 48T | 96T |
酶标板(已包被抗HMG1) | 48 孔 | 96 孔 |
样品稀释液 | 5 mL | 5mL |
第一抗体工作液 | 2.7ml | 5.5ml |
酶标抗体工作液 | 5.5ml | 10.5ml |
底物液 | 1 瓶 | 2 瓶 |
终止液 | 3ml | 6ml |
洗涤液(20×) | 25 mL | 50 mL |
标准品(冻干粉,2000pg/ml) | 1 管 | 2 管 |
坐标纸 | 1 张 | 1 张 |
封板纸 | 1 张 | 1 张 |
三、试剂盒以外自备仪器和试剂
1、标准品液配制:使用前每管中加入蒸馏水 400ul 溶解后即可。
2、洗涤液:用重蒸水 1:20 稀释。
四、HMG1试剂盒;人高迁移率族蛋白1(HMG1)ELISA试剂盒使用注意事项
1. 以上标准孔及待查样品均建议做复孔,每次测定应同时制作标准曲线。
2. 底物液使用前建议先行检查,若溶液颜色发蓝则已失效,弃去。
3. 本试剂盒取出的试剂在室温条件下使用,溶液应轻轻摇匀后使用。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,这属于正常现象,加热使结晶完全溶解后再配制。
4. 本试剂盒含 2M 硫酸,不要将它与含叠氮化钠的废物混在一起。
5. 板条开封后剩余板条要再封好,保持板条干燥。
6. 不同批号的试剂盒组分不能混用。
7. 正确拿酶标板:不要接触板的底部,否则会影响度数。
五、操作方法
1. 实验前 20 分钟从冰箱中取出试剂盒,以平衡至室温(20-25℃);
2. 取出所需数量的板条,其余密封放回 4℃;
3. 建立标准曲线:设标准孔 8 孔,每孔中各加入样品稀释液 100ul,第一孔加标准品 100nl,混匀后用加样器吸出 100ul,移至第二孔。如此反复对倍稀释至第七孔,最后,从第七孔中吸出 100ul 弃去,使之体积均为 100ul。第八孔为空白对照;
4. 加样:待测品孔中每孔加入待测样品 100ul;
5. 将反应板置 37℃120 分钟;
6. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,向滤纸上印干;
7. 每孔中加入第一抗体工作液 50ul;
8. 将反应板充分混匀后置 37℃60 分钟。
9. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,向滤纸上印干;
10. 每孔加酶标抗体工作液 100uL. 11. 将反应板置 37℃60 分钟。
12. 洗板:同前。
13. 每孔加入底物液 100uL,置 37℃暗处反应 5-10 分钟。
14. 每孔加入 50uL 终止液混匀。
15. 在 450nm 处测吸光值。(应尽快,时间过长可能导致本底偏高)
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结果计算与判断:
1.所有 OD 值都应减除空白值后再计算;
2.以标准品 1000、500、250、125、62.5、31.25、15.62、0pg/ml 之 OD 值在半对数纸上作图,画出标准曲线,将浓度作为 X 轴(对数轴),OD 值作为 Y 轴(线性轴)。曲线应为一光滑曲线。
3.根据样品 OD 值在该曲线图上查出相应HMG1含量。
六、HMG1试剂盒;人高迁移率族蛋白1(HMG1)ELISA试剂盒样品的准备和保存
样品如果不立即分析,应分装后冷冻保存,且避免反复冻融。
1、血清:用干净试管收集血液,室温凝固 30 分钟,离心 1000×g15 分钟,收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
2、血浆:采用 EDTA 抗凝,抽血后 30 分钟内离心 1000×g15 分钟。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
3、细胞培养、组织匀浆、体液:离心去除沉淀,立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
七、性能参数
产品名称:人高迁移率族蛋白1(HMG1) ELISA试剂盒
简称:HMG1试剂盒
规格:96T/48T
检测范围:62.5-4000pg/mL
检测限:23.7pg/mL
重复性:板内变异系数<10%
板间变异系数<15%
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