关注
已关注
已认证
粉丝量 0
400-860-5168转4246
仪器信息网认证电话，请放心拨打
a1M试剂盒；猪α1-微球蛋白(α1M)ELISA试剂盒适用于以下样本的测试：血清、血浆- 组织匀浆 –腹水 –细胞培养上清
产品名称：猪α1-微球蛋白(α1M)ELISA试剂盒
简称：α1M试剂盒
规格：96T/48T
检测范围：1.56-1000ng/mL
检测限：5.67ng/mL
1.实验原理：本试剂盒采用竞争法检测样本中猪α1-微球蛋白(α1M)的含量。向预先包被了抗体的酶标孔中加入样本，再加入生物素标记的识别抗原，在37℃下孵育30min，两者与固相抗体竞争结合形成免疫复合物，经PBST洗涤除去未结合的生物素抗原，然后加入亲和素-HRP，在37℃下孵育30min,亲和素-HRP与生物素抗原结合，洗涤后结合的HRP催化TMB（四甲基联苯胺）成蓝色，随后在酸的作用下转化成黄色，在450nm波长下有吸收峰，吸光值与样本中抗原的浓度成负相关。
2.试剂盒内容及其配制
3.试剂准备
a.使用前所有试剂应置于室温平衡至少30分钟。
b.本试剂盒可以直接加样，如浓度过高，可以进行适当比例的稀释（推荐2-5倍稀释），计算时应将结果乘以稀释的倍数。
c.洗涤液为25倍浓缩液，使用前将所有洗涤液倒入500ml或1L的烧杯中，用双蒸水定容到500ml即为工作液。
d.标准品的稀释：先用标准品/样品稀释液将标准品冻干粉定容到150μl，然后漩涡混匀30秒即为标准品原液（24小时内用完）。a1M试剂盒；猪α1-微球蛋白(α1M)ELISA试剂盒取5支干净的Eppendorf管，每管加150μl的标准品稀释液，分别标记上160ng/L,80ng/L,40ng/L,20ng/L ,10ng/L .取150μl标准品原液加入标记160ng/L 的管中，混匀后同样取出150μl，加入下一管，以此类推直至最后一管。零孔：直接加标准品/样品稀释液。（见下图）
e.生物素抗原的稀释：抽取生物素抗原稀释液1ml到浓缩型生物素抗原中，漩涡混匀15秒至冻干粉完全溶解，然后将所有液体移入稀释液瓶中,再次漩涡混匀30秒即为生物素抗原工作液。
f.亲和素-HRP的稀释：低速离心（使浓缩液全部沉到管底），将浓缩亲和素-HRP全部移入相应稀释液中然后漩涡混匀30秒即为亲和素-HRP工作液。
4.洗板方法
a.手工洗板：先洗去酶标孔中的的液体，在吸水纸上拍干，然后每孔加入300μl稀释好的洗涤液，轻轻摇晃30秒，然后甩掉，在吸水纸上拍干，重复4-5次。
b.洗板机洗板：洗板机洗板比较便捷，但应操作熟练后使用。
5.性能参数：
a.批内差：CV＜10%
b.批间差：CV＜12%
c.灵敏度：1ng/L
d.保存： 2-8℃
e.规格： 96T/盒
f.有效期： 6个月（2-8℃）。
6.详细操作程序
a. a1M试剂盒；猪α1-微球蛋白(α1M)ELISA试剂盒使用前请先将试剂盒在室温下平衡半小时。
b. 空白孔不加样，只加显色剂A，B和终止液用于调零。
c. 标准品孔：每孔加入稀释好的标准品50μl，零孔加入标准品/样品稀释液50μl，然后加入生物素抗原工作液50μl(零孔必须要做，并将其作为标曲的最后一个点)。
d. 样品孔：加入样品50μl（推荐直接加样，浓度高可以用样品稀释液稀释2-5倍），然后加入生物素抗原工作液50μl。
e. 轻轻摇晃，盖上封板膜，37℃培养箱中孵育30min。
f. 将25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用。
g. 第一次洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
h. 加入50μl亲和素-HRP到标准品孔和样品孔中，轻轻摇晃，盖上封板膜，37℃培养箱中孵育30min。
i. 第二次洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
j. 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
k. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色).
l. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。
m. 计算：a1M试剂盒；猪α1-微球蛋白(α1M)ELISA试剂盒根据浓度和OD值算出标准曲线的回归方程，建议用专用计算软件进行计算，推荐使用ELISAcalc进行计算，拟合模型选用logistic曲线（四参数）。标曲示意图如下：
浓度 | Blank | S5 | S4 | S3 | S2 | S1 | S0 |
OD值 | VB | V5 | V4 | V3 | V2 | V1 | V0 |
校准值 | VB-VB | V5-VB | V4-VB | V3-VB | V2-VB | V1-VB | V0-VB |
更多
企业名称
上海联迈生物工程有限公司
企业信息已认证
企业类型
信用代码
310117003747946
成立日期
2017-09-26
注册资本
100
经营范围
从事生物科技、医疗科技领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让,仪器仪表、机电设备、机械设备、玻璃制品、电子产品、一类医疗器械、化工产品及原料(除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、民用爆炸物品、易制毒化学品)的销售。【依法须经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动】
上海联迈生物工程有限公司
公司地址
上海市松江区新车公路185号上海莘莘学子创业园
客服电话
