MC3T3-E1 Subclone 14细胞;小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14

细胞名称：MC3T3-E1  Subclone 14     小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14

组织来源：颅顶骨

培养条件：MEMα +10% FBS

形　　态：贴壁；成纤维细胞样

背　　景：从克隆的但是表型各异的MC3T3-E1细胞系中分离出一系列亚克隆。从含抗坏血酸培养基生长的成骨细胞中选择高或低成骨细胞分化、矿化的亚克隆。MC3T3亚克隆4（ATCC CRL-2593）和MC3T3亚克隆14（ATCC CRL-2594）在抗坏血酸和3到4mM无机磷酸盐中生长表现出高水平的成骨细胞分化。它们10天后形成一个矿化良好的细胞外基质（ECM）。MC3T3亚克隆24（ATCC CRL-2594）和MC3T3亚克隆30（ATCC CRL-2596）在抗坏血酸中生长表现出很差的成骨细胞分化。不形成ECM， 可以作为亚克隆4和14的阴性对照。矿化的亚克隆选择的表达作为成骨细胞标记的mRNA，及唾液酸糖蛋白（BSP），骨钙素（OCN），和甲状旁腺激素/甲状旁腺激素相关蛋白受体的mRNA。高或者低的分化潜能的亚克隆在培养中生产出相似数量的胶原质，表达可比较的基本水平的mRNA编码Osf2/Cbfa1，一种成骨细胞相关转录因子。植入免疫缺陷小鼠以后，高分化性的亚克隆形成与骨类似的形成小骨的编织骨，低分化细胞只是产生纤维组织。这些细胞系是研究体外成骨细胞分化的好模型，尤其是ECM信号。它们和原代培养颅顶成骨细胞的行为类似。

MC3T3-E1 SUBCLONE 14细胞;小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14传代后不贴壁了，成团浮在培养基里，怎么办？细胞，落层生长后，消化传代，可能细胞密度大，吹打的时候有一些细胞还是成团的，可是大部分已经成单个的了，24小时后观察，细胞都成团了，不贴壁，应该没有污染。现在怎么办？重新吹打能散开吗？

技术回答：MC3T3-E1 SUBCLONE 14细胞;小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14密度过大细胞老化了，消化后聚团不贴壁说明细胞状态不好，建议重新复苏细胞。如果不甘心可以重新吹散了试试看，不过估计贴壁的也很少。可以低俗离心把状态不好的聚团细胞去除，然后把上层液体里面的细胞转移至6孔板或者24孔板培养，具体根据最后分散细胞的数量来哦~

重新吹打了MC3T3-E1 SUBCLONE 14细胞;小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14，还是有很多贴壁的细胞，可是还是有好多细胞碎片浮着，换了液还是有好多浮着。另外，培养瓶老是弄不均匀，就瓶子的四边都很密集，其他就很均匀，不知道会不会影响细胞状态？

技术回答：密集的地方容易老化，对MC3T3-E1 SUBCLONE 14细胞;小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14整体状态还是会有影响的~ 得想办法让传代的细胞均匀分布。传代完后做一下前后左右的十字运动~

细胞处理：细胞如果裂解后，RNA在普通环境下会很快降解。想要不降解，可以考虑：1.加T-Zol裂解液，-80度保存；2.分选后按细胞冻存步骤冻存，存于-80度，应该能放3-6个月。

MC3T3-E1 SUBCLONE 14细胞;小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14培养：图片聚焦没聚准，聚团现象不是很严重，状态看着也还行。悬浮细胞对血清要求较高，可以考虑换好点的血清看看。

大鼠膀胱平滑肌细胞2原代1-3/5-1,5-2ADMEM/F12+10%FBS

小鼠肺上皮细胞1原代1-2/5-4A上皮培养基+2%FBS

小鼠肾小管上皮细胞1原代1-1/1-4A上皮完全培养基

小鼠肺上皮细胞1原代1-1/1-3A上皮完全培养基

小鼠肾小管上皮细胞1原代1-1/1-5A上皮完全培养基

大鼠骨骼肌细胞2原代1-1/2-2,2-3ADMEM/F12+10%FBS

小鼠视网膜微血管内皮细胞1原代1-1/2-1A内皮完全培养基

大鼠肺上皮细胞1原代1-1/2-4A上皮完全培养基

大鼠皮肤成纤维细胞4原代1-1/2-5,3-1,3-2,3-3ADMEM/F12+10%FBS

小鼠肾小管上皮细胞4原代1-1/3-5,4-1,4-2,4-3A上皮完全培养基

大鼠膀胱平滑肌细胞1原代1-1/3-4ADMEM/F12+10%FBS

大鼠骨骼肌细胞2原代1-1/4-4，4-5ADMEM/F12+10%FBS

HUM-甲-0001-N5原代1-1/5-2,5-3，5-4，5-5组织

HUM-甲-0001-C2原代2-1/1-1,1-2组织

HUM-甲-0002-N3原代2-1/1-3,1-4,1-5组织

HUM-甲-0001-C1原代2-1/2-1组织

小鼠结肠平滑肌1原代2-1/3-3ADMEM/F12+10%FBS

大鼠肾小管上皮细胞1原代2-1/3-2A上皮完全培养基

小鼠真皮成纤维细胞6原代2-1/3-4,3-5,4-1,4-2,4-3,4-4ADMEM/F12+10%FBS

HUM-甲-0003-N1原代2-3/5-3ADMEM/F12+10%FBS