ELISA加底物显色

ELISA加底物显色

本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。间接法的优点是只要变换包

被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。

间接法成功的关键在于抗原的纯度。虽然有时用粗提抗原包被也能取得实际有效的结

果，但应尽可能予以纯化，以提高试验的特异性。特别应注意除去能与一般健康人血清发

生反应的杂质，例如以E.Coli为工程酶的重组抗原，如其中含有E.Coli成份，很可能与受过E.Coli感染者血甭中的抗E.Coli抗体发生反应。抗原中也不能含有与酶标抗人Ig反应的物

质，例如来自人血浆或人体组织的抗原，如不将其中的Ig去除，试验中也发生假阳性反

应。另外如抗原中含有无关蛋白，也会因竟争吸附而影响包被效果。

间接法中另一种干扰因素为正常血清中所含的高浓度的非特异性。病人血清中受检的

特异性IgG只占总IgG中的一小部分。IgG的吸附性很强，非特异IgG可直接吸附到固相载体

上，有时也可吸附到包被抗原的表面。因此在间接法中，抗原包被后一般用无关蛋白质

（例如牛血清蛋白）再包被一次，以封闭（blocking）固相上的空余间隙。另外，在检

测过程中标本须先行稀释（1：40~1：200），以避免过高的阴性本底影响结果的判断。