色谱峰拖尾是液相色谱分析中常见的问题之一。色谱峰拖尾能够引起色谱分离度下降,分析灵敏度降低以及定量不准确等。产生拖尾峰的原因是什么?
1. 与硅胶表面残余硅醇基的相互作用。以常用C18色谱柱为例,硅胶表面会出现各种形态的硅羟基。
当流动相中的样品与色谱柱硅胶颗粒表面上的酸性或离子化硅羟基基团之间相互作用会导致拖尾。低纯度硅胶(通常称为“A型”硅胶)具有高含量的硅羟基(-Si-OH)基团,其富含的金属杂质(特别是铁和铝)可提供阳离子交换位点,进一步促使这些基团电离成-Si-O-。可以通过添加碱性流动相添加剂(如TEA)来减少拖尾现象。
使用高纯度碱性去活硅胶颗粒色谱柱不需要使用扫尾剂,就可以获得对称对称峰型。
Avantor ACE色谱柱是基于超惰性,碱性去活硅胶颗粒平台,可产生优异的峰型,减少拖尾峰的产品。
2. 当样品中出现了碱性化合物,更容易与色谱柱柱中的硅羟基发生次级相互作用而形成拖尾。
3. 缓冲液或者流动相添加剂不当,也会造成拖尾。缓冲液主要用来使样品处于(保持)恒定的离子化状态,从而稳定保留时间,并在最大程度上减少因离子相互作用而导致的峰拖尾现象。缓冲液还可抑制硅胶表面上的硅羟基基团的电离现象。
4. 色谱图中所有峰拖尾,通常是由于物理因素所导致的。
为了防止(避免)这一问题,如果流动相可能含有颗粒物应对其进行过滤;并在泵密封严重磨损(导致颗粒物的产生)之前更换新的泵密封(密封圈)。同时应对样品进行离心和过滤,以去除颗粒。采用串联(在线)过滤器可显著延长色谱柱的使用寿命,而且经济实惠。
5. 柱外死体积太大也会导致峰型拖尾。使用与仪器匹配的管线,接头。使用不当会导致色谱峰拖尾的现象。
6. 色谱柱柱效降低导致拖尾峰,提示您需要更换新的色谱柱!
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