蛋白分析与鉴定
单克隆抗体与重组蛋白质越来越多的被作为生物治疗性制剂。相应的,LC和LC/MS方法也作为有力的分离技术而占据了重要地位,用于支持蛋白鉴定和稳定性测试。沃特世蛋白分离技术(PrST:Protein Separation Technology)产品包括反相、离子交换和分子筛色谱柱,能够很好的应对这些分离挑战。此外,我们基于HPLC的BioSuite、SEC、IEX、HIC和反相HPLC柱为这些大分子分离提供了杰出的色谱性能。
BioSuite SEC柱
BioSuite UHR(超高分辨,Ultra-High Resolution)、HR(高分辨,High Resolution)和标准SEC柱填料,使用了坚硬但仍可浸润的硅胶基质填料,在pH 2.5-7.5条件下稳定。如标准曲线图中所示,BioSuite SEC填料的排阻限由硅胶填料的颗粒孔径所决定。SEC的填料孔径以及色谱柱长是决定分离效率的重要参数。BioSuite 4μm粒径的UHR柱,提供最大分离效率,之后分别是BioSuite HR柱和BioSuite标准柱。为了使分析柱(如4.6mm或7.8mm内径)或制备柱(如21.5mm)的柱寿命最大化,我们推荐使用BioSuite保护柱。
使用BioSuite 250, HR 5μm SEC柱对BSA聚集体进行LC/MS分析
BioSuite分子筛色谱柱一览表
产品描述 填料基质 柱内径 柱长 柱体积 推荐样品浓度 推荐样品体积 部件号
BioSuite 125, 4 μm UHR SEC Silica 4.6 mm 300 mm 4.98 mL 不大于 8 mg/mL 不大于 40 μL 186002161
BioSuite 250, 4 μm UHR SEC Silica 4.6 mm 300 mm 4.98 mL 不大于 8 mg/mL 不大于 80 μL 186002162
BioSuite UHR Guard SEC Silica 4.6 mm 35 mm — — — 186002163
BioSuite 125, 5 μm HR SEC Silica 7.8 mm 300 mm 14.33 mL 不大于 8 mg/mL 不大于 200 μL 186002164
BioSuite 250, 5 μm HR SEC Silica 7.8 mm 300 mm 14.33 mL 不大于 8 mg/mL 不大于 200 μL 186002165
BioSuite 450, 8 μm HR SEC Silica 7.8 mm 300 mm 14.33 mL 不大于 8 mg/mL 不大于 200 μL 186002166
BioSuite HR Guard SEC Silica 6 mm 40 mm — — — 186002167
BioSuite 125, 10 μm SEC Silica 7.5 mm 300 mm 13.25 mL 不大于 8 mg/mL 不大于 200 μL 186002168
BioSuite 125, 13 μm SEC Silica 21.5 mm 300 mm 108.9 mL 不大于 8 mg/mL 不大于 1.6 mL 186002169
BioSuite 250, 10 μm SEC Silica 7.5 mm 300 mm 13.25 mL 不大于 8 mg/mL 不大于 200 μL 186002170
BioSuite 250, 13 μm SEC Silica 21.5 mm 300 mm 108.9 mL 不大于 8 mg/mL 不大于 1.6 mL 186002171
BioSuite 450, 13 μm SEC Silica 7.5 mm 300 mm 13.25 mL 不大于 8 mg/mL 不大于 200 μL 186002172
BioSuite 450, 17 μm SEC Silica 21.5 mm 300 mm 108.9 mL 不大于 8 mg/mL 不大于 1.6 mL 186002173
BioSuite Guard SEC Silica 7.5 mm 75 mm — — — 186002174
BioSuite Guard SEC Silica 21.5 mm 75 mm — — — 186002175
* 使用BSA蛋白作为标准品,含盐(0.1M氯化钠或0.1M硫酸钠)的50mM磷酸缓冲液作为洗脱液。可行的蛋白载量将由于分离洗脱液、样品复杂度以及样品中所含的蛋白种类而有所不同。总的说来,要使分辨率最大化,用稀释的蛋白样品溶液,尽可能以最小的进样量进样。
* 注意:对于BioSuite UHR SEC柱(4.6mm内径),合适的操作流速为0.1-0.4mL/min。使用能够在此流速条件下进行操作的HPLC系统(例如Waters Alliance HPLC系统),对获得优化的UHR SEC柱性能至关重要。
BioSuite UHR SEC柱的蛋白标准曲线
![QQ截图20151207111929.jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/201512/uepic/c2f0ce15-02dd-491d-8afc-4ae867aa3cc3.jpg)
样品:甲状腺球蛋白(Thyroglobulin, MW 670,000 Da),丙种球蛋白(Gamma globulin, MW 155,000Da),BSA(66,330 Da),-乳球蛋白(Beta lactoglobulin, MW 18,400 Da),溶菌酶(Lysozyme,14,300 Da),细胞色素C(Cytochrome C, MW 12,400 Da),三甘氨酸(Triglycine,
189 Da)。
色谱柱: BioSuite 250, UHR SEC, 4.6 mm x 300 mm, 4 μm
BioSuite 125, UHR SEC, 4.6 mm x 300 mm, 4 μm
部件号: 186002162 (BioSuite 250) & 186002161 (BioSuite 125)
流动相:0.15M磷酸钠,pH 6.8
流速: 0.35 mL/min
柱温: 25 °C
检测: UV @ 220 nm
色谱柱 球形蛋白分子量范围 支链型葡聚糖 线性PEG/PEO
BioSuite 125 5,000–150,000 1,000–30,000 500–15,000
BioSuite 250 10,000–500,000 2,000–70,000 1,000–35,000
BioSuite HR SEC柱的蛋白标准曲线
![QQ截图20151207112115.jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/201512/uepic/61dea1b5-5369-4222-9ed0-09c26944011f.jpg)
样品:甲状腺球蛋白(Thyroglobulin, MW 670,000 Da),IgG(MW 156,000 Da),BSA(66,330 Da),卵清蛋白(Ovalbumin, MW 43,000 Da),过氧化酶(Peroxidase, MW 40,200 Da),b-乳
球蛋白(Beta lactoglobulin, MW 18,400 Da),肌球素(Myoglobin, 16,900 Da),核糖核酸酶(Ribonuclease A, MW 13,700 Da),细胞色素C(Cytochrome C, MW 12,400 Da),甘氨酸四聚物
(Glycine tetramer, 246 Da)
色谱柱: BioSuite 450, HR SEC, 7.8 mm x 300 mm, 8 μm
BioSuite 250, HR SEC, 7.8 mm x 300 mm, 5 μm
BioSuite 125, HR SEC, 7.8 mm x 300 mm, 5 μm
部件号: 186002166 (BioSuite 450), 186002165 (Biosuite 250), & 186002164 (BioSuite 125)
流动相:0.1M磷酸钠,pH 7.0,含有0.3M氯化钠
流速: 1.0 mL/min
柱温: 25 °C
检测: UV @ 220 nm
色谱柱 球形蛋白分子量范围 支链型葡聚糖 线性PEG/PEO
BioSuite 125 5,000–150,000 1,000–30,000 500–15,000
BioSuite 250 10,000–500,000 2,000–70,000 1,000–35,000
BioSuite 450 20,000–1,000,000 4,000–500,000 2,000–250,000
BioSuite标准SEC柱的蛋白标准曲线
![QQ截图20151207112311.jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/201512/uepic/553ae7d3-4be1-4378-97d0-59c6245d9609.jpg)
样品:甲状腺球蛋白(Thyroglobulin, MW 670,000 Da),IgG(MW 156,000 Da),BSA(66,330 Da),卵清蛋白(Ovalbumin, MW 43,000 Da),过氧化酶(Peroxidase, MW 40,200 Da),b-乳
球蛋白(Beta lactoglobulin, MW18,400 Da),肌球素(Myoglobin, 16,900 Da),核糖核酸酶(Ribonuclease A, MW 13,700 Da),细胞色素C(Cytochrome C, MW 12,400 Da),甘氨酸四聚
物(Glycine tetramer, 246 Da)。
色谱柱: BioSuite 450, SEC, 7.5 mm x 300 mm, 13 μm
BioSuite 250, SEC, 7.5 mm x 300 mm, 13 μm
BioSuite 125, SEC, 7.5 mm x 300 mm, 10 μm
部件号: 186002172 (BioSuite 450), 186002170 (BioSuite 250) & 186002168 (BioSuite 125)
流动相:0.1M磷酸钠,pH 7.0,含有0.3M氯化钠
流速: 1.0 mL/min
柱温: 25 °C
检测: UV @ 220 nm
色谱柱 球形蛋白分子量范围 支链型葡聚糖 线性PEG/PEO
BioSuite 125 5,000–150,000 1,000–30,000 500–15,000
BioSuite 250 10,000–500,000 2,000–70,000 1,000–35,000
BioSuite 450 20,000–1,000,000 4,000–500,000 2,000–250,000
我们还提供BioSuite 4.6mm、7.8mm、7.5mm内径的分析柱,以及21.5mm内径制备柱。
![QQ截图20151207112451.jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/201512/uepic/d3780ec8-6767-4781-9da8-23d25b118dde.jpg)