饲料及其原料中呕吐霉素含量快速检测解决方案

一、饲料行业霉菌毒素污染概述

养殖行业的源头在饲料，饲料质量的好坏直接影响乳品的优劣，因此需从源头上加以控制。饲料中最主要的污染物来自霉菌毒素，不仅会通过的新陈代新带入生乳中，产生所谓的“毒奶”，更要的是霉菌毒素会危害奶牛的健康并严重影响产奶水平，造成隐形的重大经济损失。

霉菌毒素(mycotoxins)是某些真菌在污染的粮食和谷物的生长繁殖过程中，产生的具有毒害作用的次级代谢产物，由其引起的中毒症状被称作是霉菌毒素中毒症状(mycotoxicoses)。目前，已经发现霉菌毒素的种类达400多种，其化学、生物学和毒理学性质多种多样，主要的毒性作用包括致癌作用、遗传毒性、致畸作用、肝细胞毒性、中毒性肾损害、生殖紊乱和免疫抑制。霉菌毒素的存在不仅给人类及牲畜的健康带来极大的危害，也造成了相应的经济损失。据联合国粮食与农业组织(Food and Agriculture Organization of the United Nations,FAO)统计，全球每年约有25%的农作物被霉菌毒素污染，约2%的农作物因污染严重而失去营养和经济价值，造成数千亿美元的经济损失。

霉菌毒素是饲料的主要污染物之一，目前为止，全*界已经发现了300多种结构不同的霉菌毒素，其中已经被分离鉴定的有20多种。主要有：黄曲霉毒素 B1(Aflatoxin，AFB1)，玉米赤霉烯酮(zearalenone，ZEN)、呕吐毒素(deoxynivalenol，DON)等。 当动物采食被霉菌毒素污染的日粮后，健康状况会受到影响，表现出来的症状可能是多种多样的 ，比如采食量下降、生长速度变慢、抗氧化能力降低，免疫力受到抑制等，但无一例外， 最终都会影响到人畜健康和食品安全， 带来巨大的经济损失。在霉菌毒素管控上，我国《饲料卫生标准》和《宠物饲料卫生规定 》对饲料中霉菌毒素的限量做出了明确的要求， 对保障饲料卫生安全、保护动物健康有重要的作用。

二、现有检测方法比较

目前霉菌毒素的检测方法主要分为两大类:即确认方法和快速方法。确认方法主要基于理化仪器设备，如薄层色谱法(TLC)、气相色谱法(GC)、高压液相色谱法(HPLC)和各种联用技术如气质联用(GC-MS)、液质联用(HPLC-MS)等;快速方法主要是基于免疫化学基础上的免疫分析方法如免疫亲合柱-荧光检测(IAC-FLD)、酶联免疫吸附法(ELlSA)和胶体金免疫层析法等。

结果准确、法定认可是理化方法最大的优点，但是仪器设备价格昂贵，前处理过程复杂、操作繁琐、效率低，成本极高，因此不适用于大规模样本的筛查和日常的内控检测，一般仅用于最终的确证。酶联免疫吸附法ELISA 方法和胶体金快速检测卡是企业常用的快速检测方法，但也均存在各自的优缺点:ELISA 方法能灵敏度相对较高，且能定量检测，但操作过程相对复杂，对环境和人员要求高，环境干扰因素复杂，重复性较差;胶体金检测卡可以满足现场快速的要求，能在5-10min内快速测定，但是只能定性，且灵敏度较低，肉眼观察主观性较强，重复性差。

三、饲料及其原料中呕吐霉素含量快速检测解决方案介绍

饲料及其原料中呕吐霉素含量快速检测解决方案选用CSY-YG701真菌毒素荧光定量检测仪（深圳市芬析仪器制造有限公司）、电子天平、离心机、粉粹机 、涡旋振荡器检测设备，该方法操作简单，结果准确，整体测试时间15分钟左右。

实验所需仪器：

1.CSY-YG701真菌毒素荧光定量检测仪（深圳市芬析仪器制造有限公司）

2.电子天平

3.离心机

4.粉粹机  

5.涡旋振荡器

6.可调移液器1000-5000ul 可调移液器 20-200ul

第一步样品处理：

1.样品提取液配置：取一份体积的提取液加九份体积的蒸馏水，混匀后即为样品提取液。

2.样品处理：准确称取2.0g粉碎均匀的谷物样本，放入50ml离心管或者锥形瓶中，加入10ml样品提取液，用旋涡振荡器震荡3分钟混匀，混匀后即为样品液。

3.混匀后，取1.5ml均匀的样品液在离心管，并在3500转以上离心5分钟。

4.配待测液：取离心液上清液100ul+300ul样品提取液震荡5秒混匀。

第二步样品检测：

1.取60ul待测液+60ul荧光标记物,放入新的离心管中

2.把移液器刻度调至90ul，然后在离心管中吸吐3次液体（避免气泡出现）

3.混匀之后取90ul滴入检测卡内（本步骤应该在30s内完成），滴入完成之后，立即将检测卡放入CSY-YG701真菌毒素荧光定量检测仪中的恒温孵育器内孵育8分钟后进行检测。