DNA 分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。 DNA 分子在高于等电点的 pH 溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于糖 - 磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链 DNA 几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速度向正极移动。
制备琼脂糖凝胶NRBC Blood DNA Kit(200)
1 .称 1. 2g 琼脂糖,加 100ml 电泳缓冲液( 1×TAE )加热熔化,取出摇匀,即为 1. 2% 的凝胶。
2. 当胶液冷至 60℃ 时,加 EB10μl ,小心混匀,缓慢倒入制胶模具中,在胶一端插上梳子。
3 .待胶凝固后,拨出梳子,将模具置于电泳槽中,加入 1×TAE ,让液面高于胶面 2 -3mm 。
4 .取 4ul 质粒,加 2ul lodaing buffer , 6ulddH 2 O ,混匀,用加样器吸取样品。加入点样孔中,注意加样器吸头应恰好置于凝胶点样孔中,不可刺穿凝胶,也要防止将样品溢出孔外。
5 .接通电源, 1-5V/cm 电压,开始电泳。NRBC Blood DNA Kit(200)
6 .当溴酚兰染料移动到距离胶前沿 1 -50px 处,停止电泳。
7. 切断电源后,取出凝胶,在紫外灯( 360nm 、 312nm 或 254nm )下或经凝胶成像系统观察或拍照。
碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒 DNA 与线性染色体 DNA 在拓扑学上的差异来分离它们。在 pH 值介于 12. 0-12. 5 这个狭窄的范围内,线性的 DNA 双螺旋结构解开而被变性,尽管在这样的条件下,共价闭环质粒 DNA 的氢键会被断裂,但两条互补链彼此相互盘绕,仍会紧密地结合在一起。当加入 Ph4. 8 的乙酸钾高盐缓冲液恢复 pH 至中性时,共价闭合环状的质粒 DNA 的两条互补链仍保持在一起,因此复性迅速而准确,而线性的染色体 DNA 的两条互补链彼此已完全分开,复性就不会那么迅速而准确,它们缠绕成网状结构,通过离心,染色体 DNA 与不稳定的大分子 RNA 、蛋白质 -SDS 复合物等一起沉淀下来而被除去。
NRBC Blood DNA Kit(200)相关产品系列表:
xyJ599Mu 小鼠肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基4(ARPC4)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Actin Related Protein 2/3 Complex
NRBC Blood DNA Kit(200)
Subunit 4 (ARPC4)
CEC585Mu 小鼠尿皮质素2(UCN2)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Urocortin 2 (UCN2)
xyD140Mu 小鼠尿皮质素3(UCN3)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Urocortin 3 (UCN3)
xyE562Mu 小鼠TATA框结合蛋白关联因子12(TAF12)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for TATA Box Binding Protein Associated Factor 12
(TAF12)
xyF104Mu 小鼠精氨酸/丝氨酸丰富剪接因子4(SRSF4))ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Serine/Arginine Rich Splicing Factor 4
(SRSF4)
xyE020Mu 小鼠蛋白磷酸酶3调节因子亚基1(PPP3R1)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Protein Phosphatase 3, Regulatory Subunit 1
(PPP3R1)
xyE806Mu 小鼠N-甲基-D-天氡氨酸离子能谷氨酸受体2A(GRIN2A)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Glutamate Receptor, Ionotropic,
N-Methyl-D-Aspartate 2A (GRIN2A)
xyC534Mu 小鼠组氨酸丰富糖蛋白(HRG)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Histidine Rich Glycoprotein (HRG)
xyC944Mu 小鼠晶状体蛋白αB(CRYαB)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Crystallin Alpha B (CRYaB)
xyC922Mu 小鼠血小板衍生生长因子受体样蛋白(PDGFRL)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Platelet Derived Growth Factor Receptor