温育是小鼠沉默调节蛋白3(SIRT3)检测试剂盒测定中影响测定成败最为关键的一个因素。小鼠沉默调节蛋白3(SIRT3)检测试剂盒作为一种固相免疫测定,抗原抗体的结合反应在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合,必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比,即温度越高,则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。
温育这一步是临床小鼠沉默调节蛋白3(SIRT3)检测试剂盒测定中最容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟~1小时,进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1~2小时才能有较完全的结合,低于1小时,可能会影响测定下限。因此,关于温育,在实际测定操作中一定要注意以下几点:
(1)要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说,加完样本和/或反应试剂后,将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时,孔内温度从室温升至37℃,需要一定的时间,尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下,这段升温时间可能还比较长,而在临床实验室中,很少有人注意这个问题,通常是将微孔板一放入温箱即开始计时,这样就很容易造成实际测定中温育时间不够,弱阳性样本测不出来的问题。曾有一地处南方的血站同行提出了一个问题,就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时间,在做HBsAg测定的室内质控中,测定由卫生部临床检验中心供应的1 ng/ml弱阳性样本时,总是测不出来,不知原因为何?这可能就与南方冬天室内温度较低有关,此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够,以致弱阳性样本测定为阴性。因此,为保证37℃下足够的温育时间,小鼠沉默调节蛋白3(SIRT3)检测试剂盒临床实验室可自行确定本实验室不同季节(不同室温下)微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间孔内温度才能达到37℃,从而适当延长板条在温箱中的放置时间。具体的做法是,用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。
(2)温育温度的选择。在有的ELISA试剂盒的说明书中,指出温育温度可有两种,例如,一种是37℃下1小时,另一种则为43℃下45分钟。从免疫测定的抗原抗体反应的本质来看,在较低的温度下反应较长的时间最为完全。如2~8℃下反应24小时。较高的反应温度,由于分子运动的加怜惜,反应时间缩短,这一点对分子含量较多的强阳性样本的测定没有问题,但对分子含量少的弱阳性样本则有漏检的可能。因此,我们建议在临床小鼠沉默调节蛋白3(SIRT3)检测试剂盒测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。
(3)“边缘效应”的排除。以前在使用96孔板的ELISA测定中,常发现有“边缘效应”,即外周孔显色较中心孔深,产生这种“边缘效应”的原因可能为 96孔板周孔与中心孔表面或热力学特征的不同。但有研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体,在实验室的常规 ELISA测定中,将板从室温(通常在25℃左右)置于37℃温箱,板也升温时,在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时,将板和溶液均加热至温育温度(如37℃),就可以很容易地排除“边缘效应”,并且可提高测定的重复性。
总而言之,在临床小鼠沉默调节蛋白3(SIRT3)检测试剂盒测定中,要保证好的测定效果,可采用下述简单办法来确保温育条件,即尽量采用水浴,温育中让微孔板浮于水面上,或将浸透水的沙布放入一大饭盒中成一湿盒,放于温箱中,这样就会因为板条孔底部直接与37℃水或湿布的接触,以及水浴箱或湿盒内的高温度,而使反应溶液的温度迅速与温室平衡。
hzB745Hu 人血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Phosphofructokinase, Platelet (PFKP)
hzB750Hu 人肿瘤坏死因子配体超家族成员13(TNFSF13)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Tumor Necrosis Factor Ligand Superfamily, Member 13 (TNFSF13)
hzB752Hu 人Ⅰ类主要组织相容性复合体E(MHHZ)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Major Histocompatibility Complex Class I E (MHHZ)
hzB753Hu 人谷氨酸受体相互作用蛋白1(GRIP1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Glutamate ReHZptor Interacting Protein 1 (GRIP1)
hzB756Hu 人表皮转谷氨酰胺酶(TGM3)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Transglutaminase 3, Epidermal (TGM3)
hzB757Hu 人肌动蛋白束蛋白(FSCN)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Fascin (FSCN)
hzB759Hu 人羟甲基戊二酰辅酶A合酶(HMGCS)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Hydroxymethylglutaryl Coenzyme A Synthase (HMGCS)
hzB760Hu 人再生胰岛衍生蛋白1α(REG1α)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Regenerating Islet Derived Protein 1 Alpha (REG1a)
hzB761Hu 人抑瘤素M受体(OSMR)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Oncostatin M ReHZptor (OSMR)
hzB762Hu 人抑制素βB(INHβB)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Inhibin Beta B (INHbB)
hzB854Hu 人钙腔蛋白(CALU)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Calumenin (CALU)
hzB836Hu 人淀粉酶α(Amyα)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Amylase Alpha (Amya)
hzB837Hu 人白介素2受体α(IL2Rα)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Interleukin 2 ReHZptor Alpha (IL2Ra)
hzB840Hu 人小乳腺表皮粘蛋白(SBEM)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Small Breast Epithelial Mucin (SBEM)
hzB844Hu 人桩蛋白(Pax)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Paxillin (Pax)
hzA092Hu 人巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP1α)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Macrophage Inflammatory Protein 1 Alpha (MIP1a)
hzA093Hu 人巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP1β)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Macrophage Inflammatory Protein 1 Beta (MIP1b)
hzA095Hu 人巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP3α)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Macrophage Inflammatory Protein 3 Alpha (MIP3a)
hzA096Hu 人巨噬细胞炎性蛋白3β(MIP3β)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Macrophage Inflammatory Protein 3 Beta (MIP3b)
hzA097Hu 人基质金属蛋白酶1(MMP1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Matrix Metalloproteinase 1 (MMP1)
hzA098Hu 人基质金属蛋白酶10(MMP10)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Matrix Metalloproteinase 10 (MMP10)
hzA099Hu 人基质金属蛋白酶13(MMP13)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Matrix Metalloproteinase 13 (MMP13)
hzA100Hu 人基质金属蛋白酶2(MMP2)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Matrix Metalloproteinase 2 (MMP2)
hzA101Hu 人基质金属蛋白酶3(MMP3)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Matrix Metalloproteinase 3 (MMP3)
hzA370Hu 人β-血小板球蛋白(βTG)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Beta-Thromboglobulin (bTG)
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