温育是小鼠血小板衍生生长因子B(PDGFB)检测试剂盒测定中影响测定成败最为关键的一个因素。小鼠血小板衍生生长因子B(PDGFB)检测试剂盒作为一种固相免疫测定,抗原抗体的结合反应在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合,必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比,即温度越高,则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。
温育这一步是临床小鼠血小板衍生生长因子B(PDGFB)检测试剂盒测定中最容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟~1小时,进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1~2小时才能有较完全的结合,低于1小时,可能会影响测定下限。因此,关于温育,在实际测定操作中一定要注意以下几点:
(1)要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说,加完样本和/或反应试剂后,将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时,孔内温度从室温升至37℃,需要一定的时间,尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下,这段升温时间可能还比较长,而在临床实验室中,很少有人注意这个问题,通常是将微孔板一放入温箱即开始计时,这样就很容易造成实际测定中温育时间不够,弱阳性样本测不出来的问题。曾有一地处南方的血站同行提出了一个问题,就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时间,在做HBsAg测定的室内质控中,测定由卫生部临床检验中心供应的1 ng/ml弱阳性样本时,总是测不出来,不知原因为何?这可能就与南方冬天室内温度较低有关,此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够,以致弱阳性样本测定为阴性。因此,为保证37℃下足够的温育时间,小鼠血小板衍生生长因子B(PDGFB)检测试剂盒临床实验室可自行确定本实验室不同季节(不同室温下)微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间孔内温度才能达到37℃,从而适当延长板条在温箱中的放置时间。具体的做法是,用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。
(2)温育温度的选择。在有的ELISA试剂盒的说明书中,指出温育温度可有两种,例如,一种是37℃下1小时,另一种则为43℃下45分钟。从免疫测定的抗原抗体反应的本质来看,在较低的温度下反应较长的时间最为完全。如2~8℃下反应24小时。较高的反应温度,由于分子运动的加怜惜,反应时间缩短,这一点对分子含量较多的强阳性样本的测定没有问题,但对分子含量少的弱阳性样本则有漏检的可能。因此,我们建议在临床小鼠血小板衍生生长因子B(PDGFB)检测试剂盒测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。
(3)“边缘效应”的排除。以前在使用96孔板的ELISA测定中,常发现有“边缘效应”,即外周孔显色较中心孔深,产生这种“边缘效应”的原因可能为 96孔板周孔与中心孔表面或热力学特征的不同。但有研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体,在实验室的常规 ELISA测定中,将板从室温(通常在25℃左右)置于37℃温箱,板也升温时,在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时,将板和溶液均加热至温育温度(如37℃),就可以很容易地排除“边缘效应”,并且可提高测定的重复性。
总而言之,在临床小鼠血小板衍生生长因子B(PDGFB)检测试剂盒测定中,要保证好的测定效果,可采用下述简单办法来确保温育条件,即尽量采用水浴,温育中让微孔板浮于水面上,或将浸透水的沙布放入一大饭盒中成一湿盒,放于温箱中,这样就会因为板条孔底部直接与37℃水或湿布的接触,以及水浴箱或湿盒内的高温度,而使反应溶液的温度迅速与温室平衡。
hzA768Hu 人足盂蛋白(PCX)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Podocalyxin (PCX)
hzA732Hu 人前列腺抑制肽(PIP)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Prostatic Inhibin Peptide (PIP)
hzA711Hu 人肝素酶(HPA)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Heparanase (HPA)
hzA022Hu 人血管内皮细胞蛋白C受体(PROCR)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Protein C ReHZptor, Endothelial (PROCR)
hzA734Hu 人蛋白C(PROC)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Protein C (PROC)
hzA735Hu 人谷氨酸丰富蛋白(GRP)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Gla Rich Protein (GRP)
hzA736Hu 人蛋白Z(PROZ)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Protein Z (PROZ)
hzA738Hu 人激活蛋白C(APC)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Activated Protein C (APC)
hzA740Hu 人前列腺素I合酶(PTGIS)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Prostaglandin I Synthase (PTGIS)
hzB501Hu 人10kDa热休克蛋白1(HSP10)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Heat Shock 10kDa Protein 1 (HSP10)
hzB503Hu 人肌营养不良蛋白(DMD)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Dystrophin (DMD)
hzA979Hu 人亲环素A(CYPA)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Cyclophilin A (CYPA)
hzB513Hu 人烟碱型胆碱受体β2(CHRNβ2)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Cholinergic ReHZptor, Nicotinic, Beta 2 (CHRNb2)
hzB514Hu 人白介素1受体关联激酶1(IRAK1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Interleukin 1 ReHZptor Associated Kinase 1 (IRAK1)
hzB517Hu 人颗粒溶素(GNLY)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Granulysin (GNLY)
hzB518Hu 人白介素1受体关联激酶4(IRAK4)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Interleukin 1 ReHZptor Associated Kinase 4 (IRAK4)
hzB520Hu 人白介素1受体关联激酶3(IRAK3)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Interleukin 1 ReHZptor Associated Kinase 3 (IRAK3)
hzB521Hu 人黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Mucosal Addressin HZll Adhesion Molecule 1 (MAdCAM1)
hzB522Hu 人肺部激活调节趋化因子(PARC)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Pulmonary Activation Regulated Chemokine (PARC)
hzB532Hu 人维甲酸诱导基因1蛋白(RIG1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Retinoic Acid Inducible Gene 1 Protein (RIG1)
hzB537Hu 人丝氨酸蛋白酶2(PRSS2)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Protease, Serine 2 (PRSS2)
hzB539Hu 人血清淀粉样P物质(SAP)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Serum Amyloid P Component (SAP)
hzB542Hu 人甘露糖受体C1(MRC1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Mannose ReHZptor C Type 1 (MRC1)
hzB547Hu 人吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Indoleamine-2,3-Dioxygenase (IDO)
hzB559Hu 人丝切蛋白1(CFL1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Cofilin 1, Non Muscle (CFL1)
hzB560Hu 人淋巴毒素β(LTβ)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Lymphotoxin Beta (LTb)
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