温育是小鼠视紫质(RHO)检测试剂盒测定中影响测定成败最为关键的一个因素。小鼠视紫质(RHO)检测试剂盒作为一种固相免疫测定,抗原抗体的结合反应在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合,必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比,即温度越高,则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。
温育这一步是临床小鼠视紫质(RHO)检测试剂盒测定中最容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟~1小时,进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1~2小时才能有较完全的结合,低于1小时,可能会影响测定下限。因此,关于温育,在实际测定操作中一定要注意以下几点:
(1)要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说,加完样本和/或反应试剂后,将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时,孔内温度从室温升至37℃,需要一定的时间,尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下,这段升温时间可能还比较长,而在临床实验室中,很少有人注意这个问题,通常是将微孔板一放入温箱即开始计时,这样就很容易造成实际测定中温育时间不够,弱阳性样本测不出来的问题。曾有一地处南方的血站同行提出了一个问题,就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时间,在做HBsAg测定的室内质控中,测定由卫生部临床检验中心供应的1 ng/ml弱阳性样本时,总是测不出来,不知原因为何?这可能就与南方冬天室内温度较低有关,此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够,以致弱阳性样本测定为阴性。因此,为保证37℃下足够的温育时间,小鼠视紫质(RHO)检测试剂盒临床实验室可自行确定本实验室不同季节(不同室温下)微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间孔内温度才能达到37℃,从而适当延长板条在温箱中的放置时间。具体的做法是,用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。
(2)温育温度的选择。在有的ELISA试剂盒的说明书中,指出温育温度可有两种,例如,一种是37℃下1小时,另一种则为43℃下45分钟。从免疫测定的抗原抗体反应的本质来看,在较低的温度下反应较长的时间最为完全。如2~8℃下反应24小时。较高的反应温度,由于分子运动的加怜惜,反应时间缩短,这一点对分子含量较多的强阳性样本的测定没有问题,但对分子含量少的弱阳性样本则有漏检的可能。因此,我们建议在临床小鼠视紫质(RHO)检测试剂盒测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。
(3)“边缘效应”的排除。以前在使用96孔板的ELISA测定中,常发现有“边缘效应”,即外周孔显色较中心孔深,产生这种“边缘效应”的原因可能为 96孔板周孔与中心孔表面或热力学特征的不同。但有研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体,在实验室的常规 ELISA测定中,将板从室温(通常在25℃左右)置于37℃温箱,板也升温时,在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时,将板和溶液均加热至温育温度(如37℃),就可以很容易地排除“边缘效应”,并且可提高测定的重复性。
总而言之,在临床小鼠视紫质(RHO)检测试剂盒测定中,要保证好的测定效果,可采用下述简单办法来确保温育条件,即尽量采用水浴,温育中让微孔板浮于水面上,或将浸透水的沙布放入一大饭盒中成一湿盒,放于温箱中,这样就会因为板条孔底部直接与37℃水或湿布的接触,以及水浴箱或湿盒内的高温度,而使反应溶液的温度迅速与温室平衡。
hzA728Ra 大鼠环加氧酶1(PTGS1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Prostaglandin Endoperoxide SynthaHZ 1 (PTGS1)
hzA646Ra 大鼠骨形成蛋白6(BMP6)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein 6 (BMP6)
hzA651Ra 大鼠透明质酸结合蛋白1(HABP1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Hyaluronan Binding Protein 1 (HABP1)
hzA929Ra 大鼠视黄醇结合蛋白4(RBP4)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Retinol Binding Protein 4, Plasma (RBP4)
hzA653Ra 大鼠骨形成蛋白1(BMP1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein 1 (BMP1)
hzA991Ra 大鼠饥饿素(GHRL)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Ghrelin (GHRL)
hzA987Ra 大鼠醛固酮合酶(ALDOS)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Aldosterone SynthaHZ (ALDOS)
AEB264Ra 大鼠胰岛素自身抗体(IAA)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Insulin Autoantibody (IAA)
hzA223Ra 大鼠白介素1受体拮抗剂(IL1RA)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Interleukin 1 ReHZptor Antagonist (IL1RA)
hzA955Ra 大鼠Ⅰ型前胶原(PCⅠ)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Procollagen I (PCI)
hzA449Ra 大鼠胱天蛋白酶7(CASP7)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for CaspaHZ 7 (CASP7)
hzA215Ra 大鼠Ⅰ型胶原α2(COL1α2)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Collagen Type I Alpha 2 (COL1a2)
hzA702Ra 大鼠硫氧化还原蛋白(Trx)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Thioredoxin (Trx)
hzA933Ra 大鼠内凝集蛋白1(ITLN1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Intelectin 1 (ITLN1)
hzA704Ra 大鼠载脂蛋白E(APOE)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Apolipoprotein E (APOE)
hzA217Ra 大鼠α1-微球蛋白(α1M)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Alpha-1-Microglobulin/Bikunin Precursor (a1M)
hzA988Ra 大鼠细胞色素P450家族成员2E1(CYP2E1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Cytochrome P450 2E1 (CYP2E1)
hzA218Ra 大鼠转化生长因子β2(TGFβ2)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta 2 (TGFb2)
hzA706Ra 大鼠内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制因子(Vaspin)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for VisHZral AdipoHZ Tissue Derived HZrine ProteaHZ Inhibitor (Vaspin)
hzA435Ra 大鼠热休克转录因子1(HSF1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Heat Shock Transcription Factor 1 (HSF1)
hzB190Ra 大鼠白介素19(IL19)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Interleukin 19 (IL19)
hzB084Ra 大鼠甘丙肽(GAL)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Galanin (GAL)
hzA981Ra 大鼠烟碱型胆碱受体α1(CHRNα1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Cholinergic ReHZptor, Nicotinic, Alpha 1 (CHRNa1)
hzA655Ra 大鼠钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱγ(CAMK2γ)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Calcium/Calmodulin Dependent Protein KinaHZ II Gamma (CAMK2g)
hzA220Ra 大鼠肾上腺髓质素(ADM)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Adrenomedullin (ADM)
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