温育是小鼠Mdm2 p53结合蛋白同源物(MDM2)检测试剂盒测定中影响测定成败最为关键的一个因素。小鼠Mdm2 p53结合蛋白同源物(MDM2)检测试剂盒作为一种固相免疫测定,抗原抗体的结合反应在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合,必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比,即温度越高,则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。
温育这一步是临床小鼠Mdm2 p53结合蛋白同源物(MDM2)检测试剂盒测定中最容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟~1小时,进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1~2小时才能有较完全的结合,低于1小时,可能会影响测定下限。因此,关于温育,在实际测定操作中一定要注意以下几点:
(1)要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说,加完样本和/或反应试剂后,将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时,孔内温度从室温升至37℃,需要一定的时间,尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下,这段升温时间可能还比较长,而在临床实验室中,很少有人注意这个问题,通常是将微孔板一放入温箱即开始计时,这样就很容易造成实际测定中温育时间不够,弱阳性样本测不出来的问题。曾有一地处南方的血站同行提出了一个问题,就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时间,在做HBsAg测定的室内质控中,测定由卫生部临床检验中心供应的1 ng/ml弱阳性样本时,总是测不出来,不知原因为何?这可能就与南方冬天室内温度较低有关,此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够,以致弱阳性样本测定为阴性。因此,为保证37℃下足够的温育时间,小鼠Mdm2 p53结合蛋白同源物(MDM2)检测试剂盒临床实验室可自行确定本实验室不同季节(不同室温下)微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间孔内温度才能达到37℃,从而适当延长板条在温箱中的放置时间。具体的做法是,用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。
(2)温育温度的选择。在有的ELISA试剂盒的说明书中,指出温育温度可有两种,例如,一种是37℃下1小时,另一种则为43℃下45分钟。从免疫测定的抗原抗体反应的本质来看,在较低的温度下反应较长的时间最为完全。如2~8℃下反应24小时。较高的反应温度,由于分子运动的加怜惜,反应时间缩短,这一点对分子含量较多的强阳性样本的测定没有问题,但对分子含量少的弱阳性样本则有漏检的可能。因此,我们建议在临床小鼠Mdm2 p53结合蛋白同源物(MDM2)检测试剂盒测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。
(3)“边缘效应”的排除。以前在使用96孔板的ELISA测定中,常发现有“边缘效应”,即外周孔显色较中心孔深,产生这种“边缘效应”的原因可能为 96孔板周孔与中心孔表面或热力学特征的不同。但有研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体,在实验室的常规 ELISA测定中,将板从室温(通常在25℃左右)置于37℃温箱,板也升温时,在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时,将板和溶液均加热至温育温度(如37℃),就可以很容易地排除“边缘效应”,并且可提高测定的重复性。
总而言之,在临床小鼠Mdm2 p53结合蛋白同源物(MDM2)检测试剂盒测定中,要保证好的测定效果,可采用下述简单办法来确保温育条件,即尽量采用水浴,温育中让微孔板浮于水面上,或将浸透水的沙布放入一大饭盒中成一湿盒,放于温箱中,这样就会因为板条孔底部直接与37℃水或湿布的接触,以及水浴箱或湿盒内的高温度,而使反应溶液的温度迅速与温室平衡。
HZC749Mu 小鼠过氧化还原酶1(PRDX1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Peroxiredoxin 1 (PRDX1)
HZC921Mu 小鼠血小板衍生生长因子B(PDGFB)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Platelet Derived Growth Factor Subunit B (PDGFB)
HZD179Mu 小鼠核连蛋白1(NUCB1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Nucleobindin 1 (NUCB1)
HZE487Mu 小鼠溶质载体家族30成员1(SLC30A1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Solute Carrier Family 30, Member 1 (SLC30A1)
HZE488Mu 小鼠溶质载体家族30成员4(SLC30A4)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Solute Carrier Family 30 Member 4 (SLC30A4)
HZE489Mu 小鼠溶质载体家族30成员7(SLC30A7)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Solute Carrier Family 30 Member 7 (SLC30A7)
HZE691Mu 小鼠鞘氨醇1磷酸酯裂解酶1(SGPL1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Sphingosine 1 Phosphate Lyase 1 (SGPL1)
HZF235Mu 小鼠L-型电压依赖钙离子通道α1S亚基(CACNα1S)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Calcium Channel, Voltage Dependent, L-Type, Alpha 1S Subunit (CACNa1S)
HZF236Mu 小鼠L-型电压依赖钙离子通道α1C亚基(CACNα1C)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Calcium Channel, Voltage Dependent, L-Type, Alpha 1C Subunit (CACNa1C)
HZF237Mu 小鼠L-型电压依赖性钙离子通道α1D亚基(CACNα1D)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Calcium Channel, Voltage Dependent, L-Type, Alpha 1D Subunit (CACNa1D)
HZF238Mu 小鼠L-型电压依赖钙离子通道α1F亚基(CACNα1F)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Calcium Channel, Voltage Dependent, L-Type, Alpha 1F Subunit (CACNa1F)
HZF240Mu 小鼠N-型电压依赖钙离子通道α1B亚基(CACNα1B)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Calcium Channel, Voltage Dependent, N-Type, Alpha 1B Subunit (CACNa1B)
HZF241Mu 小鼠R-型电压依赖钙离子通道α1E亚基(CACNα1E)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Calcium Channel, Voltage Dependent, R-Type, Alpha 1E Subunit (CACNa1E)
HZF243Mu 小鼠T-型电压依赖钙离子通道α1H亚基(CACNα1H)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Calcium Channel, Voltage Dependent, T-Type, Alpha 1H Subunit (CACNa1H)
HZF756Mu 小鼠过氧化还原酶6(PRDX6)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Peroxiredoxin 6 (PRDX6)
HZG575Mu 小鼠溶质载体家族30成员3(SLC30A3)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Solute Carrier Family 30, Member 3 (SLC30A3)
HZG576Mu 小鼠溶质载体家族30成员5(SLC30A5)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Solute Carrier Family 30, Member 5 (SLC30A5)
HZG577Mu 小鼠溶质载体家族30成员6(SLC30A6)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Solute Carrier Family 30, Member 6 (SLC30A6)
HZH006Mu 小鼠丙糖磷酸异构酶1(TPI1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Triosephosphate Isomerase 1 (TPI1)
HZH139Mu 小鼠墨蝶呤还原酶(SPR)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Sepiapterin Reductase (SPR)
HZL523Mu 小鼠FK506结合蛋白样蛋白(FKBPL)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for FK506 Binding Protein Like Protein (FKBPL)
HZA446Mu 小鼠抑制素βC(INHβC)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Inhibin Beta C (INHbC)
HZB243Mu 小鼠心型脂肪酸结合蛋白(FABP3)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Fatty Acid Binding Protein 3, Muscle And Heart (FABP3)
HZB428Mu 小鼠腺苷酸环化酶10(ADCY10)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Adenylate Cyclase 10, Soluble (ADCY10)
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