温育是小鼠二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)检测试剂盒测定中影响测定成败最为关键的一个因素。小鼠二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)检测试剂盒作为一种固相免疫测定,抗原抗体的结合反应在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合,必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比,即温度越高,则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。
温育这一步是临床小鼠二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)检测试剂盒测定中最容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟~1小时,进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1~2小时才能有较完全的结合,低于1小时,可能会影响测定下限。因此,关于温育,在实际测定操作中一定要注意以下几点:
(1)要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说,加完样本和/或反应试剂后,将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时,孔内温度从室温升至37℃,需要一定的时间,尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下,这段升温时间可能还比较长,而在临床实验室中,很少有人注意这个问题,通常是将微孔板一放入温箱即开始计时,这样就很容易造成实际测定中温育时间不够,弱阳性样本测不出来的问题。曾有一地处南方的血站同行提出了一个问题,就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时间,在做HBsAg测定的室内质控中,测定由卫生部临床检验中心供应的1 ng/ml弱阳性样本时,总是测不出来,不知原因为何?这可能就与南方冬天室内温度较低有关,此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够,以致弱阳性样本测定为阴性。因此,为保证37℃下足够的温育时间,小鼠二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)检测试剂盒临床实验室可自行确定本实验室不同季节(不同室温下)微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间孔内温度才能达到37℃,从而适当延长板条在温箱中的放置时间。具体的做法是,用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。
(2)温育温度的选择。在有的ELISA试剂盒的说明书中,指出温育温度可有两种,例如,一种是37℃下1小时,另一种则为43℃下45分钟。从免疫测定的抗原抗体反应的本质来看,在较低的温度下反应较长的时间最为完全。如2~8℃下反应24小时。较高的反应温度,由于分子运动的加怜惜,反应时间缩短,这一点对分子含量较多的强阳性样本的测定没有问题,但对分子含量少的弱阳性样本则有漏检的可能。因此,我们建议在临床小鼠二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)检测试剂盒测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。
(3)“边缘效应”的排除。以前在使用96孔板的ELISA测定中,常发现有“边缘效应”,即外周孔显色较中心孔深,产生这种“边缘效应”的原因可能为 96孔板周孔与中心孔表面或热力学特征的不同。但有研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体,在实验室的常规 ELISA测定中,将板从室温(通常在25℃左右)置于37℃温箱,板也升温时,在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时,将板和溶液均加热至温育温度(如37℃),就可以很容易地排除“边缘效应”,并且可提高测定的重复性。
总而言之,在临床小鼠二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)检测试剂盒测定中,要保证好的测定效果,可采用下述简单办法来确保温育条件,即尽量采用水浴,温育中让微孔板浮于水面上,或将浸透水的沙布放入一大饭盒中成一湿盒,放于温箱中,这样就会因为板条孔底部直接与37℃水或湿布的接触,以及水浴箱或湿盒内的高温度,而使反应溶液的温度迅速与温室平衡。
HZF323Mu 小鼠羧肽酶N1(CPN1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Carboxypeptidase N1 (CPN1)
HZC616Mu 小鼠甲基CpG结合蛋白2(MECP2)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Methyl CpG Binding Protein 2 (MECP2)
HZD757Mu 小鼠谷光甘肽合成酶(GSS)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Glutathione Synthetase (GSS)
HZL644Mu 小鼠Egl Nine同源物1(EGLN1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Egl Nine Homolog 1 (EGLN1)
HZG529Mu 小鼠溶血卵磷脂酰基转移酶1(LPCAT1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Lysophosphatidylcholine Acyltransferase 1 (LPCAT1)
HZG530Mu 小鼠溶血卵磷脂酰基转移酶2(LPCAT2)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Lysophosphatidylcholine Acyltransferase 2 (LPCAT2)
HZG531Mu 小鼠溶血卵磷脂酰基转移酶3(LPCAT3)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Lysophosphatidylcholine Acyltransferase 3 (LPCAT3)
HZG532Mu 小鼠溶血卵磷脂酰基转移酶4(LPCAT4)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Lysophosphatidylcholine Acyltransferase 4 (LPCAT4)
HZB453Mu 小鼠胰脂肪酶(PL)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Lipase, Pancreatic (PL)
HZC924Mu 小鼠肾上腺素能受体β1(ADRβ1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Adrenergic Receptor Beta 1 (ADRb1)
HZD978Mu 小鼠肾上腺素能受体β2(ADRβ2)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Adrenergic Receptor Beta 2 (ADRb2)
HZE839Mu 小鼠醛脱氢酶9家族成员A1(ALDH9A1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Aldehyde Dehydrogenase 9 Family, Member A1 (ALDH9A1)
HZC903Mu 小鼠碘甲腺原氨酸脱碘酶Ⅱ(DIO2)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Deiodinase, Iodothyronine, Type II (DIO2)
HZD979Mu 小鼠肾上腺素能受体β3(ADRβ3)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Adrenergic Receptor Beta 3 (ADRb3)
HZK305Mu 小鼠RAS癌基因家族成员RAB5A(RAB5A)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for RAB5A, Member RAS Oncogene Family (RAB5A)
HZB109Mu 小鼠肌细胞生成素(MYOG)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Myogenin (MYOG)
HZF541Mu 小鼠白细胞衍生趋化因子2(LECT2)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Leukocyte Cell Derived Chemotaxin 2 (LECT2)
HZA659Mu 小鼠谷胱甘肽S转移酶α4(GSTα4)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Glutathione S Transferase Alpha 4 (GSTa4)
HZH775Mu 小鼠中间α-球蛋白抑制因子H5(ITIH5)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Inter Alpha-Globulin Inhibitor H5 (ITIH5)
HZM216Mu 小鼠剪接因子3B亚基3(SF3B3)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Splicing Factor 3B Subunit 3 (SF3B3)
HZP553Mu 小鼠无翅型MMTV整合位点家族成员10B(WNT10B)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 10B (WNT10B)
HZB262Mu 小鼠整合素β3(ITGβ3)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Integrin Beta 3 (ITGb3)
HZJ271Mu 小鼠二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Dihydroorotate Dehydrogenase (DHODH)
HZB308Mu 小鼠补体成分5a受体1(C5aR1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Complement Component 5a Receptor 1 (C5aR1)
HZD626Mu 小鼠ATP结合盒转运蛋白C6(ABCC6)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for ATP Binding Cassette Transporter C6 (ABCC6)
HZG315Mu 小鼠ADP核糖转移酶1(ART1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for ADP Ribosyltransferase 1 (ART1)
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