温育是小鼠类固醇5α还原酶1(SRD5α1)检测试剂盒测定中影响测定成败最为关键的一个因素。小鼠类固醇5α还原酶1(SRD5α1)检测试剂盒作为一种固相免疫测定,抗原抗体的结合反应在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合,必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比,即温度越高,则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。
温育这一步是临床小鼠类固醇5α还原酶1(SRD5α1)检测试剂盒测定中最容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟~1小时,进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1~2小时才能有较完全的结合,低于1小时,可能会影响测定下限。因此,关于温育,在实际测定操作中一定要注意以下几点:
(1)要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说,加完样本和/或反应试剂后,将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时,孔内温度从室温升至37℃,需要一定的时间,尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下,这段升温时间可能还比较长,而在临床实验室中,很少有人注意这个问题,通常是将微孔板一放入温箱即开始计时,这样就很容易造成实际测定中温育时间不够,弱阳性样本测不出来的问题。曾有一地处南方的血站同行提出了一个问题,就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时间,在做HBsAg测定的室内质控中,测定由卫生部临床检验中心供应的1 ng/ml弱阳性样本时,总是测不出来,不知原因为何?这可能就与南方冬天室内温度较低有关,此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够,以致弱阳性样本测定为阴性。因此,为保证37℃下足够的温育时间,小鼠类固醇5α还原酶1(SRD5α1)检测试剂盒临床实验室可自行确定本实验室不同季节(不同室温下)微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间孔内温度才能达到37℃,从而适当延长板条在温箱中的放置时间。具体的做法是,用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。
(2)温育温度的选择。在有的ELISA试剂盒的说明书中,指出温育温度可有两种,例如,一种是37℃下1小时,另一种则为43℃下45分钟。从免疫测定的抗原抗体反应的本质来看,在较低的温度下反应较长的时间最为完全。如2~8℃下反应24小时。较高的反应温度,由于分子运动的加怜惜,反应时间缩短,这一点对分子含量较多的强阳性样本的测定没有问题,但对分子含量少的弱阳性样本则有漏检的可能。因此,我们建议在临床小鼠类固醇5α还原酶1(SRD5α1)检测试剂盒测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。
(3)“边缘效应”的排除。以前在使用96孔板的ELISA测定中,常发现有“边缘效应”,即外周孔显色较中心孔深,产生这种“边缘效应”的原因可能为 96孔板周孔与中心孔表面或热力学特征的不同。但有研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体,在实验室的常规 ELISA测定中,将板从室温(通常在25℃左右)置于37℃温箱,板也升温时,在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时,将板和溶液均加热至温育温度(如37℃),就可以很容易地排除“边缘效应”,并且可提高测定的重复性。
总而言之,在临床小鼠类固醇5α还原酶1(SRD5α1)检测试剂盒测定中,要保证好的测定效果,可采用下述简单办法来确保温育条件,即尽量采用水浴,温育中让微孔板浮于水面上,或将浸透水的沙布放入一大饭盒中成一湿盒,放于温箱中,这样就会因为板条孔底部直接与37℃水或湿布的接触,以及水浴箱或湿盒内的高温度,而使反应溶液的温度迅速与温室平衡。
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hzD538Hu 人细胞色素P450家族成员27A1(CYP27A1)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Cytochrome P450 27A1 (CYP27A1)
hzF549Hu 人核纤层蛋白B2(LMNB2)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Lamin B2 (LMNB2)
hzL087Hu 人含WW域E3泛素蛋白连接酶2(WWP2)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for WW Domain Containing E3 Ubiquitin Protein Ligase 2 (WWP2)
hzW780Hu 人髓鞘蛋白脂蛋白样蛋白(PLPL)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Myelin Proteolipid Protein Like Protein (PLPL)
hzB480Hu 人抗甘露糖结合蛋白抗体(Anti-MBL)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Anti-Mannose Binding Lectin Antibody (Anti-MBL)
hzN330Hu 人Scleraxis同源物A(SCXA)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Scleraxis Homolog A (SCXA)
hzS728Hu 人含亮氨酸丰富重复蛋白4B(LRRC4B)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Leucine Rich Repeat Containing Protein 4B (LRRC4B)
hzA405Hu 人性别决定区Y框蛋白1(SOX1)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Sex Determining Region Y Box Protein 1 (SOX1)
hzA501Hu 人蛋白激酶N1(PKN1)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Protein Kinase N1 (PKN1)
hzA642Hu 人果糖二磷酸醛缩酶A(ALDOA)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Aldolase A, Fructose Bisphosphate (ALDOA)
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hzC187Hu 人V-Erb B2红白血病病毒癌基因同源物3(ErbB3)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for V-Erb B2 Erythroblastic Leukemia Viral Oncogene Homolog 3 (ErbB3)
hzC188Hu 人V-Erb A红白血病病毒癌基因同源物4(ErbB4)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for V-Erb A Erythroblastic Leukemia Viral Oncogene Homolog 4 (ErbB4)
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hzE182Hu 人前蛋白转化酶枯草溶菌素2(PCSK2)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin Type 2 (PCSK2)
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