小鼠丙酮酸羧化酶(PC)检测试剂盒

温育是小鼠丙酮酸羧化酶(PC)检测试剂盒测定中影响测定成败最为关键的一个因素。小鼠丙酮酸羧化酶(PC)检测试剂盒作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。

温育这一步是临床小鼠丙酮酸羧化酶(PC)检测试剂盒测定中最容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟～1小时，进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1～2小时才能有较完全的结合，低于1小时，可能会影响测定下限。因此，关于温育，在实际测定操作中一定要注意以下几点：

（1）要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说，加完样本和/或反应试剂后，将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时，孔内温度从室温升至37℃，需要一定的时间，尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下，这段升温时间可能还比较长，而在临床实验室中，很少有人注意这个问题，通常是将微孔板一放入温箱即开始计时，这样就很容易造成实际测定中温育时间不够，弱阳性样本测不出来的问题。曾有一地处南方的血站同行提出了一个问题，就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时间，在做HBsAg测定的室内质控中，测定由卫生部临床检验中心供应的1 ng/ml弱阳性样本时，总是测不出来，不知原因为何？这可能就与南方冬天室内温度较低有关，此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够，以致弱阳性样本测定为阴性。因此，为保证37℃下足够的温育时间，小鼠丙酮酸羧化酶(PC)检测试剂盒临床实验室可自行确定本实验室不同季节（不同室温下）微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间孔内温度才能达到37℃，从而适当延长板条在温箱中的放置时间。具体的做法是，用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。

（2）温育温度的选择。在有的ELISA试剂盒的说明书中，指出温育温度可有两种，例如，一种是37℃下1小时，另一种则为43℃下45分钟。从免疫测定的抗原抗体反应的本质来看，在较低的温度下反应较长的时间最为完全。如2～8℃下反应24小时。较高的反应温度，由于分子运动的加怜惜，反应时间缩短，这一点对分子含量较多的强阳性样本的测定没有问题，但对分子含量少的弱阳性样本则有漏检的可能。因此，我们建议在临床小鼠丙酮酸羧化酶(PC)检测试剂盒测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。

（3）“边缘效应”的排除。以前在使用96孔板的ELISA测定中，常发现有“边缘效应”，即外周孔显色较中心孔深，产生这种“边缘效应”的原因可能为 96孔板周孔与中心孔表面或热力学特征的不同。但有研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体，在实验室的常规 ELISA测定中，将板从室温（通常在25℃左右）置于37℃温箱，板也升温时，在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可以很容易地排除“边缘效应”，并且可提高测定的重复性。

总而言之，在临床小鼠丙酮酸羧化酶(PC)检测试剂盒测定中，要保证好的测定效果，可采用下述简单办法来确保温育条件，即尽量采用水浴，温育中让微孔板浮于水面上，或将浸透水的沙布放入一大饭盒中成一湿盒，放于温箱中，这样就会因为板条孔底部直接与37℃水或湿布的接触，以及水浴箱或湿盒内的高温度，而使反应溶液的温度迅速与温室平衡。

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hzC535Hu 人唾液富组蛋白3(HTN3)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Histatin 3 (HTN3) 

hzC648Hu 人N-乙基马来酰亚胺敏感因子(NSF)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for N-Ethylmaleimide Sensitive Factor (NSF) 

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hzC765Hu 人钙调素(RGN)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Regucalcin (RGN) 

hzC777Hu 人视紫质(RHO)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Rhodopsin (RHO) 

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hzC955Hu 人25kDa突触关联蛋白(SNAP25)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Synaptosomal Associated Protein 25kDa (SNAP25) 

hzF487Hu 人唾液富组蛋白1(HTN1)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Histatin 1 (HTN1) 

hzG012Hu 人γ-氨基丁酸A受体α2(γABRα2)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Gamma-Aminobutyric Acid A ReHZptor Alpha 2 (gABRa2) 

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hzJ114Hu 人IgA-Fc断片受体转运蛋白α(FcgRT)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Fc Fragment Of IgG ReHZptor Transporter Alpha (FcgRT) 

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hzJ370Hu 人软骨中间层蛋白2(CILP2)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Cartilage Intermediate Layer Protein 2 (CILP2) 

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hzJ675Hu 人肾上腺髓质素2(ADM2)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Adrenomedullin 2 (ADM2) 

hzJ737Hu 人白介素21受体(IL21R)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Interleukin 21 ReHZptor (IL21R) 

hzJ738Hu 人LIM和SH3蛋白1(LASP1)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for LIM And SH3 Protein 1 (LASP1) 

hzJ794Hu 人泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白1(NDUFS1)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for NADH Dehydrogenase Ubiquinone Fe-S Protein 1 (NDUFS1)