在小鼠朊病毒蛋白(PRNP)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,小鼠朊病毒蛋白(PRNP)检测试剂盒观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
实验原理
小鼠朊病毒蛋白(PRNP)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠朊病毒蛋白(PRNP)检测试剂盒相关如下:
ELISA Kit for Interleukin 1 Alpha (IL1a) 兔白介素1α(IL1α)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Anti-Brain Tissue Antibody (ABAb) 兔抗脑组织抗体(ABAb)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Myoglobin (MYO) 兔肌红蛋白(MYO)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Hemoglobin (HB) 兔血红蛋白(HB)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Annexin A1 (ANXA1) 兔膜联蛋白A1(ANXA1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Protein C Receptor, Endothelial (PROCR) 鸡血管内皮细胞蛋白C受体(PROCR)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Interleukin 6 (IL6) 鸡白介素6(IL6)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Interferon Gamma (IFNg) 鸡干扰素γ(IFNγ)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Interleukin 1 Beta (IL1b) 鸡白介素1β(IL1β)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Immunoglobulin A (IgA) 鸡免疫球蛋白A(IgA)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Growth Hormone (GH) 鸡生长激素(GH)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Insulin Like Growth Factor 1 (IGF1) 鸡胰岛素样生长因子1(IGF1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 2, Basic (FGF2) 鸡碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Immunoglobulin G (IgG) 鸡免疫球蛋白G(IgG)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Vascular Endothelial Growth Factor A (VEGFA) 鸡血管内皮生长因子A(VEGFA)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for C Reactive Protein (CRP) 鸡C反应蛋白(CRP)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta 1 (TGFb1) 鸡转化生长因子β1(TGFβ1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Interleukin 3 (IL3) 鸡白介素3(IL3)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Interleukin 9 (IL9) 鸡白介素9(IL9)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Interleukin 18 (IL18) 鸡白介素18(IL18)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Interferon Alpha (IFNa) 鸡干扰素α(IFNα)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Interferon Beta (IFNb) 鸡干扰素β(IFNβ)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta 2 (TGFb2) 鸡转化生长因子β2(TGFβ2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Nuclear Factor Kappa B (NFkB) 鸡核因子κB(NFκB)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Cholecystokinin A Receptor (CCKAR) 鸡胆囊收缩素A受体(CCKAR)检测试剂盒96t/48t
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