在小鼠嗜酸性粒细胞过氧化物酶(EPX)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)小鼠嗜酸性粒细胞过氧化物酶(EPX)检测试剂盒在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
实验原理
小鼠嗜酸性粒细胞过氧化物酶(EPX)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠嗜酸性粒细胞过氧化物酶(EPX)检测试剂盒相关如下:
ELISA Kit for ATP Binding Cassette Transporter C6 (ABCC6) 小鼠ATP结合盒转运蛋白C6(ABCC6)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for ADP Ribosyltransferase 1 (ART1) 小鼠ADP核糖转移酶1(ART1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Mdm2 p53 Binding Protein Homolog (MDM2) 小鼠Mdm2 p53结合蛋白同源物(MDM2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Ankyrin Repeat Domain Protein 1 (ANKRD1) 小鼠锚定蛋白重复域蛋白1(ANKRD1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Kallikrein 1 (KLK1) 小鼠激肽释放酶1(KLK1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein A6 (S100A6) 小鼠S100钙结合蛋白A6(S100A6)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein A10 (S100A10) 小鼠S100钙结合蛋白A10(S100A10)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Heat Shock 70kDa Protein 8 (HSPA8) 小鼠70kDa热休克蛋白8(HSPA8)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Heat Shock Protein Beta 6 (HSPb6) 小鼠热休克蛋白β6(HSPβ6)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Phosphatase And Tensin Homolog (PTEN) 小鼠磷酸酶张力蛋白同源物(PTEN)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Suppressors Of Cytokine Signaling 3 (SOCS3) 小鼠细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Insulin Receptor Substrate 1 (IRS1) 小鼠胰岛素受体底物1(IRS1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Vanin 3 (VNN3) 小鼠血管非炎性蛋白3(VNN3)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Insulin Receptor Substrate 2 (IRS2) 小鼠胰岛素受体底物2(IRS2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Wingless Type MMTV Integration Site 小鼠无翅型MMTV整合位点家族成员3A(WNT3A)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Secreted Frizzled Related Protein 2 (SFRP2) 小鼠分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Scavenger Receptor Class A Member 3 (SCARA3) 小鼠A类清道夫受体3(SCARA3)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Amyloid Precursor Protein (APP) 小鼠淀粉样前体蛋白(APP)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Rhodopsin (RHO) 小鼠视紫质(RHO)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Chordin Like Protein 2 (CHRDL2) 小鼠腱蛋白样蛋白2(CHRDL2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for NADH Dehydrogenase 1 (ND1) 小鼠NADH脱氢酶1(ND1)检测试剂盒96t/48t
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