在小鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取小鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)检测试剂盒“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
实验原理
小鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)检测试剂盒相关如下:
ELISA Kit for Matrix Metalloproteinase 3 (MMP3) 小鼠基质金属蛋白酶3(MMP3)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Beta-Thromboglobulin (bTG) 小鼠β-血小板球蛋白(βTG)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Mucin 2 (MUC2) 小鼠粘蛋白2(MUC2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for V-Fos FBJ Murine Osteosarcoma Viral 小鼠V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因同源物(FOS)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Troponin T (TNT) 小鼠肌钙蛋白T(TNT)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Nuclear Factor Kappa B2 (NFkB2) 小鼠核因子κB2(NFκB2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Cross Linked C-Telopeptide Of Type I Collagen 小鼠Ⅰ型胶原交联羧基端肽(CTXⅠ)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Cross Linked C-Telopeptide Of Type II Collagen 小鼠Ⅱ型胶原交联羧基端肽(CTXⅡ)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Prostaglandin Endoperoxide Synthase 2 (PTGS2) 小鼠环加氧酶2(PTGS2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Cluster Of Differentiation 19 (CD19) 小鼠CD19分子(CD19)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Carcinoembryonic Antigen (CEA) 小鼠癌胚抗原(CEA)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Lactate Dehydrogenase (LDH) 小鼠乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Defensin Beta 1 (DEFb1) 小鼠防御素β1(DEFβ1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Interferon Gamma (IFNg) 小鼠干扰素γ(IFNγ)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Insulin Like Growth Factor 1 (IGF1) 小鼠胰岛素样生长因子1(IGF1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) 小鼠胰岛素样生长因子2(IGF2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Insulin Like Growth Factor Binding 小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Insulin Like Growth Factor Binding 小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Insulin Like Growth Factor Binding 小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)检测试剂盒96t/48t
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