在小鼠吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取小鼠吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)检测试剂盒“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
实验原理
小鼠吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)检测试剂盒相关如下:
ELISA Kit for Kruppel Like Factor 2, Lung (KLF2) 大鼠Kruppel样因子2(KLF2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Heat Shock 70kDa Protein 5 (HSPA5) 大鼠70kDa热休克蛋白5(HSPA5)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Biliverdin Reductase A (BLVRA) 大鼠胆绿素还原酶A(BLVRA)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor Receptor 1 (FGFR1) 大鼠成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for E1A Binding Protein P300 (EP300) 大鼠E1A结合蛋白P300(EP300)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Matrix Extracellular Phosphoglycoprotein (MEPE) 大鼠细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Lymphocyte Function Associated Antigen 1 Alpha 大鼠淋巴细胞功能关联抗原1α(LFA1α)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Neuromedin U (NMU) 大鼠神经介素U(NMU)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Signal Transducer And Activator Of 大鼠信号传导转录激活因子6(STAT6)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Cocaine And Amphetamine Regulated Transcript 大鼠可卡因安非他明调节转录肽(CART)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Proopiomelanocortin (POMC) 大鼠阿黑皮素原(POMC)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Neprilysin (NEP) 大鼠脑啡肽酶(NEP)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Natriuretic Peptide Receptor 1 (NPR1) 大鼠利钠肽受体1(NPR1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Natriuretic Peptide Receptor 2 (NPR2) 大鼠利钠肽受体2(NPR2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Natriuretic Peptide Receptor 3 (NPR3) 大鼠利钠肽受体3(NPR3)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Growth Regulated Oncogene Beta (GROb) 大鼠生长调节致癌基因β(GROβ)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Growth Regulated Oncogene Gamma (GROg) 大鼠生长调节致癌基因γ(GROγ)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Vitamin D Receptor (VDR) 大鼠维生素D受体(VDR)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for ATPase, Na+/K+ Transporting Beta 3 Polypeptide 大鼠钠/钾离子转运ATP酶β3肽(ATP1β3)检测试剂盒96t/48t
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