在小鼠吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)小鼠吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)检测试剂盒在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
实验原理
小鼠吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)检测试剂盒相关如下:
ELISA Kit for Methionine Sulfoxide Reductase A (MSRA) 人甲硫氨酸亚砜还原酶A(MSRA)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Presenilin 1 (PSEN1) 人早老素1(PSEN1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Adrenergic Receptor Beta Kinase 1 (ADRbK1) 人肾上腺素能受体β激酶1(ADRβK1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Neurotensin Receptor 2 (NTSR2) 人神经降压素受体2(NTSR2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Tubulin Polymerization Promoting Protein (TPPP) 人促微管蛋白聚合蛋白(TPPP)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Anti-IgA Antibody 人抗IgA抗体(Anti-IgA)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Integrin Alpha 2B (ITGa2B) 人整合素α2B(ITGα2B)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Neutrophil Alkaline Phosphatase (NAP) 人中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Prolylcarboxypeptidase (PRCP) 人脯氨酰羧肽酶(PRCP)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Beta-Lipotropic Hormone (bLPH) 人β-促脂素(βLPH)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Histamine Receptor H1 (HRH1) 人组胺H1受体(HRH1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Aurora Kinase B (AURKB) 人Aurora激酶B(AURKB)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for GDP Dissociation Inhibitor 1 (GDI1) 人GDP解离抑制因子1(GDI1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Exosome Component 2 (EXOSC2) 人外切酶体成分2(EXOSC2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Retinoid X Receptor Alpha (RXRa) 人维甲酸X受体α(RXRα)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Semenogelin I (SEMG1) 人生精蛋白Ⅰ(SEMG1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Semenogelin II (SEMG2) 人生精蛋白Ⅱ(SEMG2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Aminoadipate Semialdehyde 人氨基乙二酸半醛磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶(AASDHPPT)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Histatin 3 (HTN3) 人唾液富组蛋白3(HTN3)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for N-Ethylmaleimide Sensitive Factor (NSF) 人N-乙基马来酰亚胺敏感因子(NSF)检测试剂盒96t/48t
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