在小鼠胆碱乙酰转移酶(ChAT)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。小鼠胆碱乙酰转移酶(ChAT)检测试剂盒然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
实验原理
小鼠胆碱乙酰转移酶(ChAT)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠胆碱乙酰转移酶(ChAT)检测试剂盒相关如下:
Rat anti-IVIgG antibody ELISAkit 大鼠抗IVIgG抗体检测试剂盒96t/48t
Rat p53/tumor protein,p53/TP53 ELISAkit 大鼠P53(P53)检测试剂盒96t/48t
Rat Cyclic guanosine monophosphate,cGMP ELISAkit 大鼠环磷酸鸟苷(cGMP)检测试剂盒96t/48t
Rat nitric oxide synthase,NOS ELISAkit 大鼠一氧化氮合成酶(NOS)检测试剂盒96t/48t
Rat inducible nitric oxide synthase,iNOS ELISAkit 大鼠诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)检测试剂盒96t/48t
Rat Endothelial nitric oxide synthase,eNOS ELISAkit 大鼠内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)检测试剂盒96t/48t
Rat lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PL-A2 ELISAkit 大鼠脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)检测试剂盒96t/48t
Rat heat shock protein 90,hSP-90 ELISAkit 大鼠热休克蛋白90(HSP-90)检测试剂盒96t/48t
Rat heat shock protein 70,hSP-70 ELISAkit 大鼠热休克蛋白70(HSP-70)检测试剂盒96t/48t
Rat heat shock protein 40,hSP-40 ELISAkit 大鼠热休克蛋白40(HSP-40)检测试剂盒96t/48t
Rat heat shock protein 20,hSP-20 ELISAkit 大鼠热休克蛋白20(HSP-20)检测试剂盒96t/48t
Rat amyloid beta peptide 1-40,Aβ1-40 ELISAkit 大鼠β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)检测试剂盒96t/48t
Rat Cyclin-D3 ELISAkit 大鼠细胞周期素D3(Cyclin-D3)检测试剂盒96t/48t
Rat Cyclin-D2 ELISAkit 大鼠细胞周期素D2(Cyclin-D2)检测试剂盒96t/48t
Rat Cyclin-D1 ELISAkit 大鼠细胞周期素D1(Cyclin-D1)检测试剂盒96t/48t
Rat myelin basic protein,MBP ELISAkit 大鼠髓磷脂碱性蛋白(MBP)检测试剂盒96t/48t
Rat Alpha-fetoprotein,AFP ELISAkit 大鼠甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)检测试剂盒96t/48t
Rat Prostatic Acid Phosphatase,PAP ELISAkit 大鼠前列腺酸性磷酸酶(PAP)检测试剂盒96t/48t
Rat Free Prostate Specific Antigen,fPSA ELISAkit 大鼠游离前列腺特异性抗原(fPSA)检测试剂盒96t/48t
Rat prostate specific antigen,PSA ELISAkit 大鼠前列腺特异性抗原(PSA)检测试剂盒96t/48t
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