在小鼠信号素7A(SEMA7A)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。小鼠信号素7A(SEMA7A)检测试剂盒然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
实验原理
小鼠信号素7A(SEMA7A)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠信号素7A(SEMA7A)检测试剂盒相关如下:
Rat Serum amyloid A,SAA ELISAkit 大鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)检测试剂盒96t/48t
Rat Haptoglobin,Hpt/HP ELISAkit 大鼠结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)检测试剂盒96t/48t
Rat α1-Acid glycoprotein,α1-AGP ELISAkit 大鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)检测试剂盒96t/48t
Rat Endothelial nitric oxide synthase 3,eNOS-3 ELISAkit 大鼠内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)检测试剂盒96t/48t
Rat cholest erolester transfer protein,CETP ELISAkit 大鼠胆固醇酯转移蛋白(CETP)检测试剂盒96t/48t
Rat cholest erolester transfer protein,CETP ELISAkit 大鼠血管紧张素原(aGT)检测试剂盒96t/48t
Rat heat shock protein 60,hSP-60 ELISAkit 大鼠热休克蛋白60(Hsp-60)检测试剂盒96t/48t
Rat malondialchehyche,MDA ELISAkit 大鼠丙二醛(MDA)检测试剂盒96t/48t
Rat Super Oxidase Dimutase,SOD ELISAkit 大鼠超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒96t/48t
Rat Heat Shock Protein glycoprotein 96,HSP gp96 ELISAkit 大鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)检测试剂盒96t/48t
Rat 50% complement hemolysis,CH50 ELISAkit 大鼠血清总补体(CH50)检测试剂盒96t/48t
Rat soluble Cluster of differentiation 86,sCD86 ELISAkit 大鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)检测试剂盒96t/48t
Rat hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α ELISAkit 大鼠低氧诱导因子1α(HIF-1α)检测试剂盒96t/48t
Rat Amylin ELISAkit 大鼠胰淀素(Amylin)检测试剂盒96t/48t
Rat Leukotriene C4,LT-C4 ELISAkit 大鼠白三烯C4(LTC4)检测试剂盒96t/48t
Rat Cytochrome-C,Cyt-C ELISAkit 大鼠细胞色素C(Cyt-C)检测试剂盒96t/48t
Rat angiotension Ⅰ,Ang-Ⅰ ELISAkit 大鼠血管紧张素Ⅰ(Ang-Ⅰ)检测试剂盒96t/48t
Rat melanocyte antibody,MC Ab ELISAkit 大鼠黑色素细胞抗体(MC Ab)检测试剂盒96t/48t
Rat Complement fragment 4a,C4a ELISAkit 大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)检测试剂盒96t/48t
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