在小鼠磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDPK1)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。小鼠磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDPK1)检测试剂盒然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
实验原理
小鼠磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDPK1)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDPK1)检测试剂盒相关如下:
Rat α-glutathione S-transferases,α-GST ELISAkit 大鼠α谷胱甘肽S转移酶(α-GST)检测试剂盒96t/48t
Rat Homocysteic acid,Hcy ELISAkit 大鼠同型半胱氨酸(Hcy)检测试剂盒96t/48t
Rat glucocorticoid receptor-β,GR-β ELISAkit 大鼠糖皮质激素受体β(GR-β)检测试剂盒96t/48t
Rat glucocorticoid receptor-α,GR-α ELISAkit 大鼠糖皮质激素受体α(GR-α)检测试剂盒96t/48t
Rat Collagen Type Ⅳ,Col Ⅳ ELISAkit 大鼠Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)检测试剂盒96t/48t
Rat Hexokinase,HK ELISAkit 大鼠己糖激酶(HK)检测试剂盒96t/48t
Rat glycogen synthase kinase,GSK ELISAkit 大鼠糖原合成酶激酶(GSK)检测试剂盒96t/48t
Rat CXC-chemokine ligand 16,CXCL16 ELISAkit 大鼠CXC趋化因子配体16(CXCL16)检测试剂盒96t/48t
Rat Ultrasensitivity Tri-iodothyronine,u-T3 ELISAkit 大鼠高敏三碘甲状腺原氨酸(u-T3)检测试剂盒96t/48t
Rat BH3 interacting domain death agonist,Bid ELISAkit 大鼠BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)检测试剂盒96t/48t
Rat Caspase-9,Casp-9 ELISAkit 大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)检测试剂盒96t/48t
Rat Orexin A ELISAkit 大鼠阿立新A(Orexin A)检测试剂盒96t/48t
Rat Caspase 3,Casp-3 ELISAkit 大鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)检测试剂盒96t/48t
Rat B-cell leukemia/lymphoma 2,Bcl-2 ELISAkit 大鼠B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)检测试剂盒96t/48t
Rat CXC-chemokine receptor 3,CXCR3 ELISAkit 大鼠CXC趋化因子受体3(CXCR3)检测试剂盒96t/48t
Rat neutrophil elastase,NE ELISAkit 大鼠中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)检测试剂盒96t/48t
Rat Tumor Specific Growth Facter/tumor supplied group 大鼠肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子(TGSF)检测试剂盒96t/48t
Rat hydroxyproline,Hyp ELISAkit 大鼠羟脯氨酸(Hyp)检测试剂盒96t/48t
Rat Osteoprotegerin Ligand,OPGL ELISAkit 大鼠骨保护素配体(OPGL)检测试剂盒96t/48t
Rat Lactoferrin,LTF/LF ELISAkit 大鼠乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)检测试剂盒96t/48t
Rat anti-Endomysial Antibody IgA,EMA IgA ELISAkit 大鼠抗肌内膜抗体IgA(EMA IgA)检测试剂盒96t/48t
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