在小鼠头蛋白(NOG)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,小鼠头蛋白(NOG)检测试剂盒在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
实验原理
小鼠头蛋白(NOG)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠头蛋白(NOG)检测试剂盒相关如下:
Human Matrix metalloproteinase 1,MMP-1 ELISAkit 人基质金属蛋白酶1(MMP-1)检测试剂盒96t/48t
Human FMS-like tyrosine kinase 3,Flt3 ELISAkit 人FMS样酪氨酸激酶3(Flt3)检测试剂盒96t/48t
Human FMS-like tyrosine kinase 3 ligand,Flt-3L ELISAkit 人FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt-3L)检测试剂盒96t/48t
Human Angiotensin converting enzyme,ACE ELISAkit 人血管紧张素转化酶(ACE)检测试剂盒96t/48t
Human alpha-1-microglobulin/bikunin precursor,AMBP ELISAkit 人α1微球蛋白/bikunin前体(AMBP)检测试剂盒96t/48t
Human podocin ELISAkit 人Podocin 检测试剂盒96t/48t
Human Nephrin ELISAkit 人肾病蛋白(nephrin)检测试剂盒96t/48t
Human α1-microglobulin,α1-MG ELISAkit 人α1微球蛋白(α1-MG)检测试剂盒96t/48t
Human microalbunminuria,MAU/ALB ELISAkit 人尿微量白蛋白(ALB)检测试剂盒96t/48t
Human Anti-adrenocortical antibody,AAA ELISAkit 人抗肾上腺皮质抗体(AAA)检测试剂盒96t/48t
Human rheumatoid arthritis associated nuclear artigen,RANA ELISAkit 人抗类风湿关节炎核抗原(RANA)检测试剂盒96t/48t
Human T-H glycoprotein,THP ELISAkit 人TH糖蛋白(THP)检测试剂盒96t/48t
Human Glomerular tissue extract-advanced glycosylation end 人肾小球组织糖基化终末产物(GTE-AGE)检测试剂盒96t/48t
Human Proteinuria,UP ELISAkit 人尿蛋白(UP)检测试剂盒96t/48t
Human low molecular-weight protein/proteasome beta- 人低分子质量蛋白7/β型蛋白酶体9(LMP7/PSMB9)检测试剂盒96t/48t
Human α2 macroglobulin,α2 MG ELISAkit 人α2巨球蛋白(α2-MG)检测试剂盒96t/48t
Human Kidney injury molecule 1,Kim-1 ELISAkit 人肾损伤分子1(Kim-1)检测试剂盒96t/48t
Human Aquaporin 5,AQP-5 ELISAkit 人水通道蛋白5(AQP-5)检测试剂盒96t/48t
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