在小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)检测试剂盒“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
实验原理
小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)检测试剂盒相关如下:
ELISA Kit for Desmin (Des) 人结蛋白(Des)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Actinin Alpha 2 (ACTN2) 人辅肌动蛋白α2(ACTN2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Mannose Associated Serine Protease 1 人甘露聚糖结合凝集素关联丝氨酸蛋白酶1(MASP1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Cystathionine Gamma Lyase (CSE) 人细胞胱硫醚γ裂解酶(CSE)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Proislet Amyloid Polypeptide (ProIAPP) 人前胰淀粉样蛋白(ProIAPP)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Activin Receptor Like Kinase 1 (ALK1) 人激活素受体样激酶1(ALK1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Cadherin, Heart (CDHH) 人心肌钙黏蛋白(CDHH)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Ficolin 3 (FCN3) 人纤维胶凝蛋白3(FCN3)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Glycoprotein VI, Platelet (GP6) 人血小板膜糖蛋白Ⅵ(GP6)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Ficolin 2 (FCN2) 人纤维胶凝蛋白2(FCN2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Aggrecan (AGC) 人聚集蛋白聚糖(AGC)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for p53 Upregulated Modulator Of Apoptosis (PUMA) 人p53上调凋亡调节因子(PUMA)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Plakophilin 1 (PKP1) 人血小板亲和蛋白1(PKP1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Kallikrein 7 (KLK7) 人激肽释放酶7(KLK7)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Mothers Against Decapentaplegic Homolog 4 (Smad4) 人Smad同源物4(Smad4)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Angiopoietin Like Protein 2 (ANGPTL2) 人血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Monokine Induced By Interferon Gamma (MIg) 人干扰素γ诱导单核因子(MIγ)检测试剂盒96t/48t
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