在小鼠25kDa突触关联蛋白(SNAP25)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,小鼠25kDa突触关联蛋白(SNAP25)检测试剂盒观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
实验原理
小鼠25kDa突触关联蛋白(SNAP25)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠25kDa突触关联蛋白(SNAP25)检测试剂盒相关如下:
ELISA Kit for Vimentin (VIM) 人波形蛋白(VIM)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Vitronectin (VTN) 人玻连蛋白(VTN)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Cholecystokinin 8, Octapeptide (CCK8) 人胆囊收缩素八肽(CCK8)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Protein Kinase C Beta 1 (PKCb1) 人蛋白激酶Cβ1(PKCβ1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for 1,5-Anhydroglucitol (1,5-AG) 人1,5-脱水葡萄糖醇(1,5-AG)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Trefoil Factor 1 (TFF1) 人三叶因子1(TFF1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Estrogen Receptor Alpha (ERa) 人雌激素受体α(ERα)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Cholecystokinin B Receptor (CCKBR) 人胆囊收缩素B受体(CCKBR)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Oxytocin (OT) 人催产素(OT)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Apoptotic Peptidase Activating Factor 1 (APAF1) 人凋亡蛋白酶激活因子1(APAF1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Ubiquitin Protein Ligase E3A (UBE3A) 人泛素连接酶E3A(UBE3A)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Polymeric Immunoglobulin Receptor (PIGR) 人多聚免疫球蛋白受体(PIGR)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Secretin (SCT) 人促胰液素(SCT)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Phospholipase A2, Group IID (PLA2G2D) 人ⅡD组磷脂酶A2(PLA2G2D)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein A12 (S100A12) 人S100钙结合蛋白A12(S100A12)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Heat Shock 70kDa Protein 1A (HSPA1A) 人70kDa热休克蛋白1A(HSPA1A)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Galanin (GAL) 人甘丙肽(GAL)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Superoxide Dismutase 2, Mitochondrial (SOD2) 人线粒体超氧化物歧化酶(SOD2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Alkaline Phosphatase, Intestinal (ALPI) 人肠碱性磷酸酶(ALPI)检测试剂盒96t/48t
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