培养基制造和灭菌的办法以及步骤

微生物培育基是供微生物成长、繁衍、代谢的混合养料。因为微生物具有不同的养分类型，对养分物质的要求也各不相同，加之研究的意图不同，所以培育基的种类许多，运用的质料也各有差异，但从养分视点剖析，微生物培育基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、成长素以及水分等。别的，培育基还应具有适合的 pH 值、必定的缓冲才能、必定的氧化还原电位及适宜的渗透压。为了到达特定要求的研究，需求进行培育基制造和灭菌，那么微生物培育基该怎么制造与灭菌呢?

1. 调理 pH 值
用 pH 试纸 (或 pH 电位计、氢离子浓度比色计) 测验培育基的 pH 值， 如不契合需求，可用 10%HCl 或 10%NaOH 进行调理, 直到调理到配方要求的 pH 值停止。

2. 分装
已过滤的培育基应进行分装。 如果要制造斜面培育基，须将培育基分装于试管中。 如果要制造平板培育基或液体、半固体培育基，则须将培育基分装于锥形瓶内。

3. 过滤
用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培育基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。

4. 制造溶液
向容器内参加所需水量的一部分，按照培育基的配方，称取各种质料，顺次参加使其溶解，最终补足所需水分，对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热进程所蒸腾的水分，应在悉数质料溶解后加水补足。
制造固体培育基时，先将上述已配好的液体培育基煮沸，再将称好的琼脂参加，持续加热至彻底消融。并不断搅拌，防止琼脂糊底烧焦。
分装时，一手捏松绷簧夹，使培育基流出，另一只手抓住几支试管或锥形瓶，顺次接取培育基。分装时, 注意不要使培育基粘附管口或瓶口，防止浸湿棉塞引起杂菌污染。
装入试管的培育基量，视试管和锥形瓶的巨细及需求而定。一般制造斜面培育基时，每只 15×150 毫米的试管，约装 3～4 毫升 (1/4～1/3 试管高度)，如制造深层培育基，每只 20×220 毫米的试管约装 12～15 毫升。每只锥形瓶装入的培育基，一般以其容积的一半为宜。

5. 制造斜面培育基和平板培育基
培育基灭菌后，如制造斜面培育基和平板培育基，须趁培育基未凝结时进行。
(1) 制造斜面培育基。在试验台上放 1 支长 0.5～1 米左右的木条，厚度为 1 厘米左右，将试管头部枕在木条上，使管内培育基天然歪斜，凝结后即成斜面培育基。
(2) 制造平板培育基。将刚刚灭过菌的盛有培育基的锥形瓶和培育皿放在试验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手翻开培育皿盖, 右手敏捷将培育基倒入培育皿中，每皿约倒入 10 毫升，以铺满皿底为。铺放培育基后放置 15 分钟左右，待培育基凝结后，再 5 个培育皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24 小时后查看，如培育基末长杂菌，即可用来培育微生物。

6. 加棉塞
分装结束后, 需求用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的首要意图是过滤空气，防止污染。棉塞应选用普通新鲜、干燥的棉花制造，不要用脱脂棉，防止因脱脂棉吸水使棉塞无法运用。制造棉塞时，要根据棉塞巨细将棉花铺展成恰当厚度，揪取手掌心巨细一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，一起左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成 1 个长棒形的棉塞。棉塞作成后，应敏捷塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为适宜。棉塞的 2/3 应在管内或瓶内，上端露出少量棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。