ELISA检测试剂盒的操作秘诀

ELISA检测试剂盒的操作秘诀

有2种方法来检验试验的精确度：通常用变异系数来表示，①几个样品用ELISA法同时进行多次测定求出CV%；②不同时间对不同操作者对某几个样进行多次测定求出变异系数。CV是个体参数标准差与平均数的比率。

        不论目测或分光光度计测定，均可作一个稀释度或一系列稀释度测定，一般常规诊断只用一个稀释度判断阳性或阴性就可以了，这样比较方便，现在推荐传染病的血清诊断用1：200一个稀释度。有些需要精确定量的，可作一系列稀释度测定。记录结果有下列几种方法：

        1.“+"或“-"：所有超过规定的OD值(如OD，0.4)的标本均属阳性，此规定OD值是根据事先测定大量阴性标本所取得的，此规定值是阴性标本的上限。ELISA检测试剂盒或者以一组阴性标本OD平均值加2～3个标准差作为阳性阈值。

        2.直接以OD值来表示，如0.4、0.7、1.2，OD值越大，阳性反应越强，但此数值是在固定实验条件下得到的结果，而且每次实验都要有参考标本作对照。

        3.以终点滴度表示：将标本作连续稀释，最高稀释度能出现阳性反应者(即OD值仍大于阳性阈值)，即为该标本的滴度。

        4.以“比值"表示：求出被检标本的OD值与一组阴性标本OD值的比值，例如为阴性标本的2倍或3倍，即为阳性，比值小于2.1而大于1.5为可疑，<1.5为阴性。

        5.以“单位"来表示：在测定被检标本的同时，再测定一个含已知单位数的阳性参考血清，用不同稀释度作ELISA检测试剂盒后，以OD值为纵坐标，单位数为横坐标，画出标准曲线。以后可根据被检标本的OD值，从曲线上找出相应的单位数，再乘于血清的稀释倍数，即可得出被检标本的单位数。

        作试验时的阴性参考血清最好不要显色，否则会对结果判断带来困难，特别在目测时，当阳性标本OD值>2.0时，应作适当稀释后再作测定。