小鼠α半乳糖基抗原（α-gal）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

小鼠α半乳糖基抗原（α-gal）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围： 96T

15pg/ml -400 pg/ml

使用目的：

本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中α半乳糖基抗原（α-gal）含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠α半乳糖基抗原（α-gal）水平。用纯化的

抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入α半乳糖基抗原（α-gal），

再与HRP 标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB

显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深

浅和样品中的α半乳糖基抗原（α-gal）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD

值），通过标准曲线计算样品中小鼠α半乳糖基抗原（α-gal）浓度。

试剂盒组成

1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶

2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（800pg/ml） 0.5ml×1 瓶

3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶

4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份

5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张

6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个

标本要求

1. 血清：

室温血液自然凝固10-20 分钟后，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保

存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

2. 血浆：

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20 分钟后，离心20

分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。

尿液：

用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀

形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

4.细胞培养上清：

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。

5.培养细胞:

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100 万/ml 左右。

通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左

右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

6.组织标本:

切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化

后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀

浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检

测，其余冷冻备用。

7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进

行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

8.不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀

释。

400pg/ml 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液

200pg/ml 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液

100pg/ml 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液

50pg/ml 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液

25pg/ml 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，

然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽

量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此

重复5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

10 分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止

液后15 分钟以内进行。

操作程序总结：

计算

以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的

OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标

准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，

即为样品的实际浓度。

注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未

用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好

控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值

大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计

算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 个月