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ELISA实验假阳性、本底高甚至花板的原因与解决方法
2024/10/23 13:43
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方案摘要：
产品配置单：
大鼠P选择素(SELP)ELISA试剂盒
型号： 48T/96T
产地：
品牌： 远慕
¥1
参考报价
大鼠NADH脱氢酶1(ND1)ELISA试剂盒
型号： 48T/96T
产地：
品牌： 远慕
¥1
参考报价
方案详情：
酶联免疫吸附测定（ELISA）因其具有敏感性高、特异性强等优点，被广泛应用于科研和临床检测中的各种抗原和抗体的测定。 一般来说，ELISA可分为四大类：直接ELISA、间接ELISA、夹心ELISA、竞争抑制ELISA。其他的ELISA基本上都隶属于这四类ELISA或由这四类ELISA组合衍生而来。
尽管不同类型的ELISA实验原理及具体步骤不尽相同，其中存在的许多问题却是相同或类似的，应关注的细节也大致相同。这些问题/细节对检测效果影响较大，或者可能导致假阳性或假阴性的结果。因此要想得到比较真实、满意的实验数据，并不是很容易的事情。
ELISA实验假阳性、本底高甚至花板的原因与解决方法
序号 | 原因 | 解决方法 |
1 | 试剂过期 | 重新购置在有效期内的试剂 |
2 | 加样时污染 | 注意更换吸头，尽量避免污染。 |
3 | 加酶时污染 | 对先加样后加酶的操作，加酶时要注意吸头不要接触标本，造成污染。当可能造成污染时，一定要更换吸头，切记侥幸心理。 |
4 | 恒温箱温度过高 | 注意控制恒温箱温度，尽可能让其稳定在37±0.5℃。 |
5 | 整个操作时间过长，造成反应时间不同（第一孔与最后一孔反应时间相差悬殊）。环境温度高时更明显。 | 在尽可能短的时间内完成操作。尽量不要堆积多块板子操作（尤其是手工操作时）。 |
6 | 洗涤液稀释倍数过高 | 按照要求倍数稀释洗涤液 |
7 | 洗板次数不够 | 按要求操作，不可任意减少洗板次数。 |
8 | 洗板时浸泡时间不够 | 按要求操作，或适当延长浸泡时间。 |
9 | 手工洗板方式不正确 | 洗板时垂直加入洗液，保证一定的冲击力；洗液要注满板孔，并保证30-60秒的浸泡时间。 |
10 | 酶被污染 | 防止组分的污染。如使用容器，注意容器的清洁。 |
11 | 显色液B液被污染 | |
12 | 显色完后没有或没有及时终止反应。 | 显色完应立即终止反应。 |
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