细胞培养中出现的“颗粒”问题分析

　　细胞培养中常见的“颗粒”可分为胞内和胞外两种，很多小伙伴因为不清除这些“颗粒”的来源，害怕污染而将细胞丢弃，不仅浪费心力，还耽误实验进度，接下来我们逐步分析这些“颗粒”产生的原因。

　　1、细菌或真菌污染

　　真菌污染相对来说比较好鉴别，一般肉眼可见培养基上层漂浮的霉斑或显微镜下可见菌体，细菌的菌体相对较小，显微镜下呈棒状、球状或者杆状，由于细菌增值产生酸性物质，短期内培养基变黄，浑浊，细沙状沉淀。

　　2、细胞碎片

　　消化不当或者PH、渗透压、温度的变动可能引起细胞死亡，产生碎片。

　　3、凋亡小体

　　程序性死亡细胞的核DNA在核小体连接处断裂成核小体片段，形成浓缩的染色质块。随着染色质不断聚集，核膜在核孔处断裂，形成核碎片。同时由于不断脱水，细胞质不断浓缩，细胞体积减小。整个细胞通过发芽、起泡等方式形成一个球形的突起，并在其根部绞窄而脱落形成一些大小不等，内含胞质、细胞器及核碎片的小体称为凋亡小体。

　　4、支原体集落

　　支原体无细胞壁，直径为0.1-0.3μm，且形态易变，极易通过除菌过滤器，单个的支原体无法显微镜观察，目前已知的主要污染源是动物血清、胰酶和已污染培养物的气溶胶。来源广泛、不易过滤、难以观察，给细胞培养带来了极大隐患。单个的支原体无法从显微镜下观察，支原体集落却可以被捕捉到。

　　5、黑胶虫

　　谈到黑胶虫，大家应该都对他神秘的“身世”有印象，目前多数黑胶虫被鉴定为细菌，黑胶虫最明显的特征是运动，但是这里远慕要提醒大家，支原体集落，可能也会出现运动的现象。

　　6、血清中的物质

　　血清反复冻融或者经过灭活后，可能会产生“小黑点”，此外不要认为会增多的一定是微生物污染，血清质量不好，影响细胞生长，衰老细胞增多形成细胞碎片，也会呈现细胞长势不佳，黑点增多的现象。

　　经过分析，许多老师肯定又觉得混乱，细胞培养遇到“颗粒”到底如何应对？

　　首先，如果是微生物污染，不重要或者可替代的细胞，我们都建议丢弃，并排查污染来源，被污染的试剂也要丢弃，并且对使用的仪器和环境进行除菌，比较重要的细胞，可以用含抗生素的缓冲液清洗过后，使用含较高浓度双抗或三抗培养，尝试消除，对于支原体和黑胶虫污染，使用相应的支原体清除剂和黑胶虫清除剂进行处理。

　　其他情况我们建议优先排查血清质量，特别是更换血清批次的，选择质量好的血清也是细胞培养成功与否的关键所在，除非实验特殊要求，其他情况下，不建议对血清进行灭活处理。而细胞正常凋亡产生的碎片，可以低俗离心分离完整细胞和细胞碎片，参考条件为300-500rpm 3min，根据实际情况进行调整，可以用缓冲液清洗几次。

　　最后需要注意的是某些细胞正常培养过程中会出现一些“颗粒”物质，属于正常现象，小伙伴们一定要多查阅资料，熟悉培养细胞的特性。