小鼠血小板生成素(TPO)ELISA试剂盒操作步骤

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中文名：小鼠血小板生成素(TPO)ELISA试剂盒

中文别名：小鼠血小板生成素(TPO)ELISA Kit

供应商：上海远慕

规格：48t/96t

保存：2-8℃

有效期：6个月

库存状态：现货供应。

保 存：2-8℃,避光保存。

适用范围：仅用于科研实验，禁用于临床。

性能:敏感性高，特异性强，重复性。

ELISA试剂盒种属：人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、猪犬、牛羊、鸡鸭、植物ELISA试剂盒等。

试剂盒检测目的：用于测定血清，血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。

小鼠血小板生成素(TPO)ELISA试剂盒优点：

1.高效、灵敏、特异的抗体；

2.稳定的重复性和可靠性；

3.吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；

4.适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；

小鼠血小板生成素(TPO)ELISA试剂盒操作步骤注意事项：

(1).实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

(2).试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

(3).使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。 

(4).不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。  

(5).洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

(6).使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

(7).加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

(8).按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

(9).底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

小鼠血小板生成素(TPO)ELISA试剂盒标本要求：

1. 血清： 

室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 

2. 血浆： 

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。 

3. 尿液： 

用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。 

4. 细胞培养上清： 

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

5. 培养细胞: 

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 

6. 组织标本: 

切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 

7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 .

8.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

小鼠血小板生成素(TPO)ELISA试剂盒操作步骤：
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800ng/L，1200ng/L，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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