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名称:pUC18载体,大肠系列质粒
供应商:上海远慕
适用范围:仅限科研实验,不作临床
用途:克隆外源基因。
产地:国产|进口
规格:5μg
浓度:250~1,000μg/ml
贮存溶液:Tris-HCl (pH 8.0) 10 mM EDTA 1mM
载体类型: 克隆载体
pUC18是适合于双脱氧法DNA测序的载体,通常运用于重组dna的分子克隆中,首先我们制备大肠杆菌的感受态细胞(能接受外来重组的dna),这种感受态菌株必须不同外来DNA分子发生遗传重组,通常是rec基因缺陷型的突变体,同时它们必须是限制系统缺陷或限制与修饰系统均缺陷的菌株,即具有这三种缺陷(rk mk rec ),同时对氨苄青霉素敏感(ap)。
pUC18上带有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和β-半乳糖苷酶N 端146 个氨基酸的编码序列,在这个编码区中插有一个多克隆位点,且不影响正常功能,DH5α感受态菌株带有β-半乳糖苷酶C 端部分序列的编码信息,当puc18载体在正常情况下同感受态菌株融合后,互补表达有活性的β-半乳糖苷酶,称为α-互补现象,当有外源片段插入多克隆位点后,不能产生互补,即细菌不能产生β-半乳糖苷酶活性。在呈色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷酶)和诱导物IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)的存在下,互补产物菌落呈现蓝色,不互补产物菌落呈白色,很容易鉴别,这种筛选方法称为α-互补现象筛选(蓝白斑筛选)。由上可见,puc18载体除了能重组导入外源片段外,在筛选表达过程中还具有重要的作用。
pUC18载体,大肠系列质粒用途:
1. 脱氧核糖核酸片段的克隆。
2. 利用lac promoter进行基因表达。
3. 使用M13系列引物进行DNA测序。
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