人Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)ELISA试剂盒操作步骤

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中文名：人Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)ELISA试剂盒
别名：人Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)ELISA Kit
供应商：上海远慕
规格：48t/96t
保存：2-8℃
有效期：6个月
特点：敏感性高、特异性强、重复性好、试剂稳定、易保存，操作简便。
用途：用于测定血清，血浆及相关液体样本中相关含量或活性。
检测种属：大小鼠、人、豚鼠、兔子、猪、犬、牛羊、鸡鸭ELISA试剂盒等种属。
常见ELISA试剂盒：白介素、选择素、集落刺激因子、肿瘤坏死因子、干扰素、转化生长因子、趋化因子、细胞因子受体、粘附分子、生长因子、凋亡因子等等。
适用范围：仅用于科研实验，禁用于临床。

人Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)ELISA试剂盒使用优点：ELISA试剂盒可特异性定量测定疾病相关蛋白，包括细胞因子、趋化因子、β淀粉样蛋白与信号转导靶标。

1.灵敏，准确和一致的性能

2.用血清、血浆、组织培养上清或裂解产物进行过验证

3.在半天内可完成的现成，方便的检测

人Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)ELISA检测试剂盒样品收集、处理及保存方法：
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

人Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)ELISA试剂盒操作步骤注意事项：
1.试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2.实验中不用的试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
3.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
4.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
5.使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
6.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
7.洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
8.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
9.加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
10.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

人Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)ELISA试剂盒组成及试剂配制：
1.酶联板(Assay plate )：一块(96孔)。
2.标准品(Standard)：2瓶(冻干品)。
3.样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent)：1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent)：1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体(Biotin-antibody)：1×120μl/瓶(1：100)
7.辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin)：1×120μl/瓶(1：100)
8.底物溶液(TMB Substrate)：1×10ml/瓶。
9.浓洗涤液(Wash Buffer)：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10.终止液(Stop Solution)：1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

人Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)ELISA试剂盒操作步骤：
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制)，37℃,60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100μl，37℃，60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色(30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止)。
7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。

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