猪内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒说明书

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中文名：猪内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒
别名：猪内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA Kit
货号：ym-r00187
供应商：上海远慕
规格：48t/96t
保存：2-8℃
有效期：6个月
标本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。
使用范围：仅供科研使用,不得用于临床。
产品用途：用于测定人血清,血浆,组织及相关液体样本中的含量或活性。
本司ELISA试剂盒优点：
1．特异性强：不与其它细胞因子反应。
2．重复性好：板内、板间变异系数均小于10%。
3．稳定性高：实验效果很稳定。
4．超灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品，稀释度和样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

检测原理：
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被样本抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻 底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的样本呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

猪内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒说明书 本试剂盒组成：
1、包被抗-HBs反应条 1瓶
2、酶结合物 1瓶
3、HBsAg阳性对照 1瓶
4、HBsAg阴性对照 1瓶
5、洗涤液：用前每瓶作1：20稀释 1瓶
6、显色剂（TMB）A 1瓶
7、显色剂（TMB）B 1瓶
8、终止液 1瓶

猪内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA检测试剂盒操作方法：
1、加入待测标本每孔0.05ml，并设HBsAg阳性对照2孔，HBsAg阴性对照2孔，空白对照1孔，然后加入酶结合物每孔1滴（0.05ml、空白对照孔不加），充分混匀后置37℃孵育30分钟。
2、洗板：弃去反应条孔内液体、拍干、用洗涤液注满每孔，弃去拍干，反复五次后拍干。
3、显色剂：先加显色剂A每孔1滴（0.05ml），然后再加显色剂B每孔1滴（0.05ml），混匀，37℃孵育10分钟。
4、每孔加终止液1滴（0.05ml），混匀。

ELISA试剂盒结果：
比色法：波长450nm，先用空白孔校零点，然后读取各孔光密度值。
样品OD值/阴性对照平均OD值≥ 2.1判断为阳性，否则为阴性。
备注：阴性对照平均OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。阳性对照OD值≥0.8，实验结果有效。

猪内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA检测试剂盒说明：
1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中,英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。

猪内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒说明书 本试剂盒液体类标本: 

包括血清,血浆,尿液,胸腹水,脑脊液,细胞培养上清等。
1. 血清：
室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

2. 血浆：
应根据标本的要求选择EDTA,柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

3. 尿液：
用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水,脑脊液参照此实行。

4. 细胞培养上清：
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

5. 培养细胞
检测细胞内的成份时,用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。


猪内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA Kit注意事项：

1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。

2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4、牢记样本已经稀释5倍，计算结果乘以5才是样本实际浓度。

5、本试剂盒定量范围为50-1600pg/mL，超过此范围，为标准曲线延伸计算所得，不做为准确定量结果，请用标准品稀释液稀释后测定准确结果（50-1600pg/mL范围内），乘以总稀释倍数即为样本最终浓度。

6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

7、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔；不得重复使用封板膜。

8、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。

9、底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

猪内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA检测试剂盒使用优点：ELISA试剂盒可特异性定量测定疾病相关蛋白，包括细胞因子、趋化因子、β淀粉样蛋白与信号转导靶标。
■灵敏，准确和一致的性能
■用血清、血浆、组织培养上清或裂解产物进行过验证
■在半天内可完成的现成，方便的检测

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