人25羟基维生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA试剂盒

上海远慕生物科技详细讲述了人25羟基维生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA试剂盒的操作使用说明书，品牌，价格，规格 ，操作步骤，注意事项等，专业代理出售不同ELISA试剂盒品牌的进品/国产ELISA试剂盒，为客户提供免费代测服务，ELISA种属涵盖有大鼠，小鼠，人，猴，鸡，猪，狗，牛及其他科研实验动物，了解更多种属请来电咨询！

中文名：人25羟基维生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA试剂盒
别名：人25羟基维生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA Kit
供应商：上海远慕
规格：48t/96t
保存：2-8℃
有效期：6个月
适用范围:仅供科研使用,不得用于临床。
检测目的:用于测定血清，血浆及相关液体等样本，例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。

ELISA试剂盒安全性：
1.避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2.实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
4.试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
5.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
6.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
7.使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 

酶联免疫方法常见标本的处理方式：
1、采集血浆时一般不加抗凝剂（主要为枸橼酸盐和柠檬酸盐），采集后立即离心800-1000rmpx5min分离，取上清，-20℃或4℃保存备用；
2、采集血清时，一般要加入总体积1%的抗凝剂，采集后先室温或4℃静置半小时后，800-1000rmpx5min分离，取上清，-20℃或4℃保存备用；
3、胃液和唾液的采集方式一般现采现用，一般饭后半小时内不易采集（刚进食的唾液中富含丰富的唾液淀粉酶），最好的采集时间是空腹采集；
4、尿液的采集方式基本和唾液一样的，即现采现用，但是一般隔夜尿不采集；
5、组织提取液（肺泡灌洗液等），采集后离心分离，800-1000rmpx5min，取上清，-20℃或4℃保存备用；
6、粪便以及天然孔排泄物：采集后一般现用PBS/生理盐水溶解，充分混匀，800-1000rmpx5min分离，取上清，-20℃或4℃保存备用；
7、贴壁细胞或半贴壁（分泌性蛋白），直接将细胞培养上清吸出，10000rmpx10min，取上清，-20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理；
8、不贴壁细胞（分泌性蛋白），将培养基和细胞转移至10ml离心管，500-800rmpx10min，吸取上清至另一10ml离心管中，10000rmpx10min，-20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理；
9、贴壁细胞或半贴壁（非分泌性蛋白），直接将细胞培养上清吸出，然后用0.01MPBS（pH7.4）将细胞吹下至10ml离心管，500-800rmpx10min，弃上清，沉淀转移至1.5ml离心管中，DDW重悬，置冰水浴中用超声波裂解仪进行裂解，10000rmpx10min，取上清，-20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理；
10、不贴壁细胞（非分泌性蛋白），将培养基和细胞转移至10ml离心管，500-800rmpx10min，弃上清，沉淀移至另一10ml离心管中，0.01MPBS（pH7.4）重悬，500-800rmpx10min，弃上清，沉淀移至1.5ml离心管中，DDW重悬，置冰水浴中用超声波裂解仪进行裂解，10000rmpx10min，取上清，-20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理。

人25羟基维生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA试剂盒性能:
1．准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
2．灵敏度：最低检测浓度小于10 pg/ml。
3．特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

人25羟基维生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA检测试剂盒标本要求：

1．标本采集后尽早进行实验。血清、血浆可以直接检测
2．组织：按相关文献提取后，取上清液待测

3．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

4．可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

人25羟基维生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA检测试剂盒操纵步骤：

1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为（60μg/L ，40μg/L，20μg/L，10μg/L， 5μg/L）。

2.加样：分别设空缺孔（空缺对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操纵相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终极稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  
4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃往液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃往，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加进酶标试剂50μl，空缺孔除外。

7.温育：操纵同3。

8.洗涤：操纵同5。

9.显色：每孔先加进显色剂A50μl，再加进显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空缺空调零，450nm波长依序丈量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

人25羟基维生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA Kit计算：

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回回方程式，将样品的OD值代进方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

人25羟基维生素D(25-OH-D)ELISA Kit注意事项：

1.试剂盒从冷躲环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装进密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其正确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数目多，推荐使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5.严格按说明书的操纵进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准

6.底物请避光保存。

7.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

人25羟基维生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA Kit使用优点：ELISA试剂盒可特异性定量测定疾病相关蛋白，包括细胞因子、趋化因子、β淀粉样蛋白与信号转导靶标。
■灵敏，准确和一致的性能
■用血清、血浆、组织培养上清或裂解产物进行过验证
■在半天内可完成的现成，方便的检测

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