人神经调节蛋白1（NRG-1）ELISA试剂盒操作使用说明书

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人神经调节蛋白1（NRG-1）ELISA试剂盒操作使用说明书详细介绍：
中文名：人神经调节蛋白1(NRG-1)ELISA试剂盒
别名：人神经调节蛋白1(NRG-1)ELISA Kit
供应商：上海乔羽
规格：48t/96t
保存：2-8℃
保质期：6个月
用途：主要用于科研方面，不用于临床诊断。可以用于检测各种指标。
试剂盒成分：酶标板，试剂，标准品等。
种属：人、大小鼠、豚鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、植物等。

人神经调节蛋白1(NRG-1)ELISA试剂盒测定：
1.体液中的各种蛋白质，包括含量极少的蛋白质如甲胎蛋白等。
2.激素，包括小分子量的甾体激素等。
3.抗生素和药物。
4.病原体抗原，HBsAg、HBeAg等。
5.另外，也可利用纯化的抗原检测标本中的抗体，例如抗-HBs等

人神经调节蛋白1(NRG-1)ELISA检测试剂盒需自备的设备及试剂：    
1. 450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)
2. 单道或多道微量加液器及吸头
3. 稀释样品的EP管
4. 蒸馏水或去离子水
5. 吸水纸
6. 盛放洗液的容器

人神经调节蛋白1（NRG-1）ELISA试剂盒操作使用说明书 本试剂盒标本要求：
1.血清： 
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 
2.血浆： 
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。 
3.尿液： 
用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。 
4.细胞培养上清： 
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。 
5.培养细胞: 
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 
6.组织标本: 
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 
7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 
8.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 

人神经调节蛋白1(NRG-1)ELISA检测试剂盒操作步骤： 
?标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，依次进行稀释数倍。
?加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
?温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
?配液：将30倍（48T 的20 倍）浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
?洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
?加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 
?温育：操作同3。
?洗涤：操作同5。
?显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
?终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
?测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
 
计算结果：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 
 
人神经调节蛋白1(NRG-1)ELISA试剂盒注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
 
人神经调节蛋白1(NRG-1)ELISA试剂盒操作事项：
1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2. 加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间（包括标准品及所有样品）最好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3. 孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响最后的酶标仪读数。
5. 试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置（如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl），以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6. 反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如，每隔10分钟），如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
  建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
  如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。

人神经调节蛋白1(NRG-1)ELISA检测试剂盒洗板方法：
1. 手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟，根据需要，重复此过程数次。
2. 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
 
特别说明：
1: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） 
2: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃，有效期6个月.
 
ELISA试剂盒特点体现： 
 1、高效、灵敏、特异的抗体；
?2、稳定的重复性和可靠性；
?3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；
?4、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；
?5、节省实验经费。

ELISA试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度，损失越少，回收率越高，如果作标液1PPM，就是1毫克/升，而作出标准数据为0.99毫克/升，就是说你的回收率是99%，这个与真实成分有密切的关系，说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定，样品水中含有无机氯20mg/L，取100mL被测水样品，加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品，测定时忽略体积变化，如果测定出样品中无机氯为2.98mg/L，则认为回收率为99%。