核糖核酸(酵母)RNA, 63231-63-0

RNA提取是很多科研实验中非常重要的前置环节，获得一个完整的RNA才能为下游各类实验奠定坚实的基础。为了确保RNA的完整性，从样品采集到提取RNA，我们会采取很多手段保护其不受降解

标准品溶解度是指一定温度下，溶解于一定体积的溶剂中的溶质的质量。通常认为溶解度良好或者溶解充分，是指溶液澄清无肉眼可见的不溶物质。

色谱分析实验中，标准品使用方式灵活多样：（少量纯品配制成）低浓度标液直接使用、（纯品配制成）高浓度标准溶液稀释使用。我们在实验室天天接触，熟悉却不一定了解它们。一支标准品从原液或纯品形态“变身”为直接使用的形态，通常会经历标准品→储备液→工作液阶段，不同阶段的有效期也不同。

准备工作，培养基的配制及灭菌（121-126度灭30分钟高压蒸汽式灭菌），玻璃器皿的灭菌（170度灭2小时干热灭菌，也可用湿热灭菌）若量大可加长灭菌时间。

流式细胞术（flowcytometry，FCM）是一种综合应用光学、机械学、流体力学、电子计算机、细胞生物学、分子免疫学等学科技术，使被测溶液流经测量区域，并逐一检测其中每一个细胞的物理和化学特性，从而对高速流动的细胞或亚细胞进行快速定量测定和分析的方法。

Trizol试剂的主要成分是苯/酚。苯/酚的主要作用是对细胞进行裂解，从而使细胞当中的蛋白质以及核酸物质解聚而得以释放。苯/酚虽然可以有效的使蛋白质变性，但它不能完全抑制RNA酶的活性，因此Trizol中还加入了8－羟基喹/啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（即RNA酶）。 Trizol试剂不但可用于小量样品（组织：50-100mg；细胞：5×106），也可用于大量样品（组织≥1g或细胞≥107），对动物、植物、细菌、血液提取都适用，可同时处理大量不同样品。反应迅速，提取的总RNA没有DNA和蛋白质污染，可用于Northernblot、RT-PCR、RNase保护分析等。

用过的试管要立即用清水冲洗干净；但滴瓶上的滴管不能用水冲洗，也不能交叉使用。

抽提方法的优化。基于苯酚的方法的最大问题是分层不彻底和部分 RNA 的丢失(不能全部将上清取出)。分层不彻底是因为核酸和蛋白质含量高，可以用增加裂解液使用量或者降低样品量解决。脂肪组织要增加一步氯仿抽提。RNA 的丢失可以用反抽方法或者去除有机层后再离心的方法降低。基于柱离心式方法的最大问题是样品过量。

标准品一词常作为泛称。在色谱分析工作中，我们进行样品理化分析时常用的标准品大多属于“化合物纯度/浓度标准品”。此时，“标准品”这一称呼涵盖了非医药行业常说的“标准物质”、“标准样品”以及医药行业常说的“中药对照品”、“化学对照品”等。

有些标准品非常昂贵，厂商只能以非常小的包装提供给客户，如1mg5mg10mg等，拿到产品时可能会觉得瓶子是空的，这种情况是由于粉末状的物质会分散在瓶壁和盖子上，而液体状物质会在瓶壁形成一层可能看不见的液层。

免疫学技术：是指在免疫学长期发展过程中形成的一套独特的研究手段和计数，包括人工免疫防治技术（疫苗和血清）和免疫检测技术（抗原抗体检测和机体免疫功能检测） 免疫学研究涉及到的重要技术包括：单克隆抗体技术、T细胞克隆技术、转基因及基因编辑技术、分子杂交技术、聚合酶链反应技术等。

实验原理 iRNA是用某种抗原免疫动物后，从免疫动物的免疫活性细胞中提取出来的RNA。它具有传递相应抗原特异性免疫信息的能力，因而注入体内后，可发挥对该抗原的免疫清除作用。 iRNA的免疫学作用机理目前尚无定论，一般认为iRNA具有直接模板作用，即iRNA以mRNA的形式在受体细胞中起模板作用，从而合成与免疫反应有关的蛋白质，使正常非致敏的淋巴细胞转变成致敏淋巴细胞。另外，也有人认为iRNA具有逆转录作用、免疫调控作用及“超抗原”作用等。

一般情况下提取的RNA已经足够，而且在逆转录过程中RNA的质量要远较RNA的数量更重要，一般仅取上清的上1/2左右足矣，这样可最大限度避免对于中间蛋白相的扰动

　　注意事项： 　　从少量样品（1-10mg组织或102-104细胞）中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品，沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来，糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成，也不影响PCR反应。 　　匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。 　　分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机，2600×g离心30-60分钟。 　　预期产量：1mg组织或1×106细胞提取RNA分别为： 　　肝和脾6-10μg，肾3-4μg，骨骼肌和脑组织1-1.5μg，胎盘1-4μg，上皮细胞8-15μg，成纤维细胞5-7μg 。