生化试剂常见问题的几点解决办法
1 .样品信息
样品的溶血、脂血、黄疸等会对测定成果发生非化学反应的干扰。因此,应根据溶血、脂浊、黄疸的光谱吸收特性,采用双波长或多波长的检测形式,并在成果核算中扣除因溶血、脂血、黄疸引起的影响,减少干扰程度。
2 .试剂空白
试剂空白吸光度是反映试剂质量的目标。每种试剂都有必定的空白吸光度规模,试剂空白吸光度的改变往往提示该试剂的变质;有些试剂久置后变浑浊。这些状况均可使空白吸光度升高。往往需要加大用量,才使“表观”吸光度上升,将就过试剂空白核对的“关”,其成果为如下状况:
①线性规模变窄 现象:高值测不高。原因:生产试剂时有效成分投料量缺乏;试剂成份稳定性较差。
② 灵敏度变低现象:酶促反应速度曲线斜率下降,测定成果有严峻系统误差。原因:试剂底物浓度缺乏。
③低值偏高 现象:试剂空白的改变曲线(吸光度VS时刻)显着动摇。原因:试剂自身不稳定,自行分解;东西酶纯度不够,杂酶含量超限,导致干扰效果。
3 .测定规模
每种待测物都有一个可测定的浓度或活性规模,样品成果若超越此规模,分析仪将显示成果超越规模的提示。表明试剂现已变质,应更换合格试剂。
4 .底物耗尽
使用连续监测法、两点法测定酶活性时,若酶活性十分高,底物接近被耗尽,吸光度上升或下降会超越某一吸光度改变规模,监测期的吸光度将偏离线性,使测定成果不可靠。
5 .酶的预活化
测定血清中的某些酶,如CK,离体(采血)后很简单失活。只有通过适当的还原效果才能重新激活。在AST,ALT采用IFCC推荐办法测定时需要磷酸吡哆醛预活化。需要强调:含有活化剂的生化试剂,其测定酶活性的成果要高些。
6 .校准与成果溯源性
酶的校对:要满足在同一办法学、同一测定条件、与理论核算的FACTOR值差异不大,没有发现有显着影响因素,方可进行校对。