牛血清白蛋白的提取方法

上海远慕生物科技有限公司

2024/01/30 10:29

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　　胎牛血清白蛋白（BSA），又称第五组分，是牛血清中的一种白蛋白，包含583个氨基酸残基，分子量为66.430 kDa，等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用，例如在western blot中作为Blocking agent;在酶切反应缓冲液中加入BSA，通过提高溶液中蛋白质的浓度，对酶起保护作用。防止酶的分解和非特异性吸附，能减轻有些酶的变性，能减轻有些不利环境因素如加热，表面张力及化学因素引起的变性。是胎牛血清中的一种球蛋白，一般获取胎牛血清白蛋白，常常运用的方法是加热法。

　　下面一起来看看是怎样获取胎牛血清白蛋白的！

　　一、所需材料

　　胎牛血清以柠檬酸三钠为抗凝剂，血液搜集后随即分别出血浆备用。需要的试剂有血清白蛋白；溴jia酚氯；醋酸纤维素薄膜，别的试剂均为分析纯。获取胎牛血清白蛋白需要准备 LG-6型大容量冷冻离心机，DF-C型电泳仪，UV-754型紫外可见分光光度计，PHS-2型酸度计。

　　二、具体方法

　　白蛋白含量测定选用溴jia酚氯法，以胎牛血清白蛋白为规范. 白蛋白纯度的测定选用醋酸纤维素薄膜电泳法。吸光度值的测定用分光光度计直接测定蛋白质溶液在波长为403 nm处的光吸收值，然后折算成浓度为10 g/L时牛血清白蛋白的光吸收值，用A403表明。

　　胎牛血清白蛋白的生产工艺新鲜抗凝牛血用LC-6型大容量离心机(3 000 r/min×30 min)离心分别出血浆，加一定量的蒸馏水稀释，再参与恰当的稳定剂和蛋白沉淀剂，然后按下述方法进行试验处理：

　　1.不一样pH值溶液对白蛋白的收率和质量的影响在其它条件固定的情况下，试验不一样pH值对白蛋白的收率、纯度及A403值的影响。

　　2.不一样加热保温时间对白蛋白的收率和质量的影响在选定的pH值和其它条件固定的情况下，试验不一样加热保温时间对白蛋白的收率、纯度及A403值的影响。

　　3.不一样稀释倍数对白蛋白的收率和质量的影响在选定的pH值和保温时间及其它条件固定的情况下，试验不一样稀释倍数对白蛋白的收率、纯度及A403值的影响。

　　4.不一样加热温度对白蛋白的收率和质量的影响在其它条件选定的情况下，试验不一样加热温度对白蛋白的收率、纯度及A403值的影响。